动物源大肠杆菌药基因与HPI毒力基因的检测及相关性分析.pdfVIP

Anhui Agricultural University Master Dissertation Detection and correlation analysis of resistance and HPI virulence genes in Escherichia coli from animals Candidate: Chen Wei Supervisor: Professor. Qi Ke-zong Academic Degree applied for: Master of Medicine Major: Nutrition and Food Hygiene Direction: Animal Origin of Food Hygiene Detection College: College of TeaFood Science and Technology June 2013 国家自然科学基金资助项目： 《禽源致病性大肠杆菌HPI 毒力岛缺失株构建及其致病性研 究》 项目编号 摘 要 大肠杆菌（Escherichia coli ）是一种重要的能引起食源性疾病的人畜共患病原菌， 随着抗菌药物的滥用,大肠杆菌耐药性情况 日益严重，而细菌的耐药性可通过多种途 径进行传播，引起交叉耐药，严重威胁着人类的健康。耶尔森菌强毒力岛(high pathogenicity island, HPI)通过夺取宿主中的铁元素来增强细菌在宿主体内存活的机 率，进而加重对机体患病的感染能力，毒力岛的发现和研究，对深入了解细菌性疾 病的发生、发展过程以及对疾病的预防控制都有着深远影响。 以大肠杆菌耐药基因和HPI 标志性基因为研究对象，设计特异性引物，采用PCR 技术对两类基因进行特异性扩增，通过反应条件和反应体系的优化，建立大肠杆菌 ESBLs 耐药基因 （TEM、SHV）和 HPI 毒力基因 （irp1、irp2、fyuA ）的双重 PCR 检测方法，并对大肠杆菌中耐药基因和 HPI 毒力基因之间的相关性进行了分析。 具体研究内容和结果如下： 1、动物源大肠杆菌分离株耐药表型的检测 采用 NCCLS 推荐的 K-B 法来检测大肠杆菌分离株（猪源 25 株、鸡源 12 株） 对 20 种抗菌药物的耐药性，以大肠杆菌ATCC 25922 为药敏质控菌，记录并分析实 验结果。 猪源大肠杆菌分离株对于常见的抗菌药物阿莫西林（24/25 ，96% ）、苯唑西林 （23/25 ，92% ）、氨苄西林（22/25 ，88%）、羧苄西林（21/25 ，84%）、阿莫西林/棒 酸（21/25 ，84%）、氯霉素（23/25 、92% ）表现出很强的耐药性（≥80% ）。 鸡源大肠杆菌分离株对于兽医临床中常见的抗菌药物苯唑西林（12/12，100% ）、 氨苄西林 （11/ 12，91.7% ）、羧苄西林 （11/12，91.7% ）、阿莫西林 （9/ 12，81.8% ）、 阿莫西林/棒酸 （9/12，81.8%）表现出很强的耐药性 （≥80% ）。 其次猪鸡源大肠杆菌对链霉素（18/25 ，72%、7/12，63.6% ）、强力霉素（19/25 ， 76%、6/11，54.5% ）、复方新诺明（14/25 ，56 %、7/11，63.6% ）、诺氟沙星（13/25 ， 52%、7/11，63.6% ）表现出较强的耐药性（50%～80% ）。大肠杆菌分离株呈现出多 重耐药，其中对 8～14 种抗菌药物具有多重耐药性的菌株占总分离株 73.0%（27/37 ）。 该结果对于大肠杆菌分离株中的耐药性做了一个初步的检测分析，为后续基因型试 验提供基础数据。 2、动物源大肠杆菌分离株耐药基因和HPI毒力岛基因的PCR检测 以大肠杆菌耐药基因与HPI毒