双向电泳与质谱结合筛选鸡脑组织中TOCP诱发OPIDN相关蛋白.pdf

双向电泳与质谱相结合筛选 鸡脑组织中TOCP诱发OPIDN相关蛋白 硕士生姓名：吕飞燕 指导教师：朴丰源 教授 专业名称：劳动卫生与环境卫生学 摘 要 目的：以“有机磷化合物和PMSF的双受体影响”假说为理论依据， 通过双向电泳和质谱分析，筛选OPIDN诱发相关差异表达蛋白，并探讨 TOCP的oPIDN作用机制。 方法：罗曼鹤母鸡24只，1 0月龄，体重1．5～2．0kg，适应性喂养一 周后用于试验。根据“双受体影响假说”分别将鸡随机分为4组，即对照 000 mg／kg， 经灌胃一次给予、PMSF用量为40 mg／kg，经皮下注射一次给予。 物，取各组动物脑组织。并且测定四组鸡大脑双向电泳表达图谱。在双 向电泳表达图谱筛选差异明显的点进行质谱鉴定。 库，蛋白表达差异2倍以上的点视为差异显著。将差异表达蛋白点的肽 质量指纹谱和分子量、等电点的数据输入计算机，用MASCOT软件的 MS MS离子方式在蛋白质数据库中搜索，找寻与之匹配的相关蛋白质， 同时查询其功能。肽质量指纹谱容许误差0．3Da，分子量容许误差4-20％。 结果：在对照组和l 测到l332和l295个蛋白点，能相互匹配的占78．31％。PMSF和 PMSF+TOCP两组分别检测到l295和1294个蛋白点，且与对照组的匹 配率均大于75％。与对照组相比，TOCP染毒组鸡脑中具有显著差异表 达的蛋白点有236个，其中差异达到4倍以上的蛋白点数有32个。根据 “双受体影响假说”筛选出其中差异最明显的4个点进行质谱鉴定，鉴定 结果为16l 1．66 2点主要为谷氨酰胺(GS)，等电点为8．26，分子量为3 kD。117 l kD。1 kD。 l067点荷马蛋白(homer．1b)，等电点为5．54，分子量为44．40kD。且 这四个蛋白与对照组比，TOCP组均表达下调(P0．05)；其余两组与 对照组比表达均没有显著变化。 结论：通过“有机磷化合物和PMSF的双受体影响假说”从TOCP暴 露组中共筛选出236个蛋白点可能与迟发性神经毒性相关，其中 homer．1b、谷氨酰胺、谷氨酰胺酶这三个蛋白可能是OPIDN发生过程中 的关键蛋白。 关键词：三磷甲苯磷酸酯 双向电泳 质谱鉴定 有机磷化合物的迟发 性神经毒性 2 Isolationand Correlatingproteins Identification Using Two-DimensionaandMass eIectl。ophoresis induced inOPIDN TOCPinthe Spectrometry by cerebrumofhens