应用SNP分型术对汉坦病毒宿主动物遗传特征的研究.pdfVIP

中 文 摘 要 应用SNP 分型技术对汉坦病毒宿主动物 遗传特征的研究 摘 要 目的：了解河北省肾综合征出血热疫源地鼠种构成、带毒率及宿主 动物所携带汉坦病毒与遗传特性间的关系，指导本病的预防和控制。 方法： 1 疫源地调查，夹夜法捕鼠，无菌取鼠肺； 2 用冷冻切片机切鼠肺，冷丙酮固定，间接免疫荧光法筛选汉坦病 毒阳性鼠肺； 3 从阳性和阴性鼠肺中提取总RNA ； 4 根据文献以及 GENBANK 中已知的 SNP 位点查找特异性引物， 用等位基因特异性引物聚合酶链反应（ASP-PCR ）进行扩增，并进行电 泳和观察结果； 5 根据电泳结果，对 SNP 位点进行分型，分析基因多态性特征。通 过病例对照研究（Case-control Study ）分析HV 宿主动物单核苷酸多态性 与宿主动物HV 携带状态的关系。 结果： 1 鼠间疫情资料显示褐家鼠占总捕获鼠种的 64.90%，是河北省的优 势鼠种。河北省居民区鼠种主要为褐家鼠和小家鼠，分别占居民区总捕 获鼠种的 73.38%和 24.10% ；野外鼠种主要为褐家鼠、大仓鼠和小家 鼠，分别占野外总捕获鼠种的 54.72%、20.75%和 13.21%。河北省居民 区鼠密度为2.16% ，高于野外鼠密度（0.53% ）。 2 将 527 份鼠肺冷冻切片，冷丙酮固定后用间接免疫荧光法检测， 阳性鼠肺共 17 份,阳性率为 3.23% 。提示我省肾综合征出血热疫源地鼠 带毒率较低，带毒鼠为宅区褐家鼠，野外及其它鼠种未检出。 3 rs8153609 位点等位基因和基因型频率在各研究组中的分布：根据 Hardy-Weinberg 平衡公式检验，携带 HV 与未携带 HV 两组标本中均存 在 C 、T 两种等位基因，推算出 CC 、CT 、TT 三种基因型的理论频数 （预期值），结果显示 2 χ =1.339 ，p=0.512 ＞0.05 ，说明实际基因型频率与 1 中 文 摘 要 期望基因型频率的差异没有统计学意义，其分布符合 Hardy-Weinberg 平 衡，有较好的群体代表性。 rs8153609 位点基因型与等位基因频率的比较结果显示， HV 携带组 和未携带组 rs8153609 位点 CC 基因型频率分别为 0%和 28.13% ，TT 基 因型频率分别为 21.74%和 25.00% ，CT 基因型频率分别为 78.26%和 46.87% ，CC、TT 基因型频率 HV 携带组低于未携带组，CT 基因型频率 HV 携带组明显高于未携带组（ 2 χ ＝8.729，P=0.0090.05 ），基因型频率 差异有显著性。提示 rs8153609 位点的基因型可能与 HV 感染相关，CT 基因型的存在可能会增加宿主动物感染HV 的机会。HV 携带组和未携带 组rs8153609 位点C 等位基因频率分别为39.13%和51.56%，T 等位基因 频率分别为 60.87% 和 48.44% ，统计学分析没有显著性差异（ 2 χ ＝ 1.663，P=0.197 ＞0.05 ）。rs8153609 位点C 和T 等位基因频率在HV 携带 组和未携带组中未发现差别。 rs8153609 位点不同基因型与 HV 携带状态的比较结果显示， CT 基 因型标本HV 的感染率为54.55%， CC 基因型及TT 基因型标本HV 的感 染率为22.73% ， CT 基因型标本HV 的感染率明显高于CC 基因型及TT 基因型标本HV 的感染率（ 2 χ ＝5.493，P=0.019 ﹤0.05 ）。CT 基因型标本 感染 HV 的危险性是 CC 基因型及