建立化学发光酶疫法检测猪肉中磺胺嘧啶的研究.pdf

摘要 摘 要 随着养殖业的迅猛发展，动物源性食品的安全问题受到人们的普遍关注， 其中尤以药物残留问题更为突出，是影响动物源性食品安全的主要因素。磺胺 食品动物的肝、肾、肌肉、脂肪及奶中。磺胺嘧啶(sulfadiazine，SD)的常规检 测方法主要包括高效液相色谱法、色谱一质谱联用法等理化检测方法，以上检测 方法需经过繁琐的样品前处理，效率较低、检测成本高，难以满足基层检测的 实际需要。免疫学检测方法具有灵敏度高、方便快捷、成本低等特点，已被大 量用于食品安全与检测中。本研究在制备SD全抗原的基础上，制备抗SD单 克隆抗体(monoclonalantibodies，McAb)；并利用该抗体建立SD的化学发光酶 Immunosorbent 免疫检测方法(ChemiluminescentEnzyme．Linked Assay, CLEIA)。主要研究内容如下： (1)采用重氮法、戊二醛法制备SD免疫抗原与检测抗原，并免疫BALB 小鼠，制备SD多克隆抗体。对两种方法制备的抗原进行鉴定，发现重 氮法优于戊二醛法。重氮法制备的摩尔结合比分别为3．7：1、8．0：1、9．0：1 三种免疫抗原中，又以结合比为8．0：1的抗原免疫效果最佳。 McAb。 (2)在成功制备SD多克隆抗体的基础上，采用杂交瘤技术，制备SD 经细胞融合、阳性筛选、亚克隆，获得一株稳定分泌抗SDMcAb的杂 交瘤细胞，命名为1F6。通过体内诱生法制备了McAb腹水，间接酶联 Immunosorbent 免疫吸附法(Enzyme．Linked Assay,ELISA)测定腹水效 X 价为l：1．28 2b，亲和常数5．5×109 106，经类型鉴定，抗体亚类为IgG SQX、PABA、SN、SMT、p-ASA交叉反应率较低或未见交叉反应。 线性范围为6．4219．8 ng／mL，IC50、LOD分别为37．6、5．1ng／mL，加 标回收率71．0．96．3％，批内变异系数在0．9--7．4％，批间变异系数在 7．6～10．5％。用建立的CLEIA法对随机抽取的南昌市售猪肉样本进行 SD含量测定，并与HPLC法进行比对验证，结果显示两种方法的相关 系数R2=0．9386。 关键词：磺胺嘧啶；单克隆抗体；ELISA；CLEIA；猪肉；HPLC Abstract ABSTRACT of in animal Withthe food edible breed，thesafety rapiddevelopment problems have considerable for isoneof residue，it productsprovoked debates，especiallydrug themost arecommon the importantproblems．SAs veterinarydrugs，ifproper