甜菜碱对apo基因缺陷小鼠AS发生及TNF-α甲基化的影响.pdfVIP

甜菜碱对印oE基因缺陷小鼠AS发生及TNF-a甲基化的影响 中文摘要 甲基化的影响 专 业：营养与食品卫生掌 硕士研究生：范舒跏乞 导 师：朱意莲副教授 中文摘要 人类健康。AS是引起脑梗塞、心肌梗塞以及冠心病等心脑血管疾病的病理基础， AS及其并发症的发病率、死亡率现已上升到所有疾病之首。但是目前为止AS 的发病机制还不十分清楚，对AS的预防和治疗仍缺乏有效的措簏。DNA甲基 化是DNA分子的一种复制后共价修饰方式，它能够调控基因表达。DNA甲基 化异常与肿瘤发生的关系是二十几年来医学界研究的热点。近年来的研究表明， 在AS发生过程中也同样存在DNA甲基化模式的异常改交，AS中DNA甲基 化的改变除了基因组广泛低甲基化外，还存在局部CpG岛的异常高甲基化。在 因素致AS发生过程中，均发现有DNA甲基化的异常改变，因此推测基因组甲 基化模式异常可能是AS的发生机制之一。甜菜碱有3个活性甲基，是高效的 甲基供体。并且现有研究已经表明它能够降低血浆同型半胱氨酸浓度，防治脂 肪肝，改善血脂等。为了进一步了解甜菜碱对AS发生发展的作用，以及在此 过程中DNA甲基化模式的异常改变，探讨其可能的作用机。我们应用apoE基 因缺陷小鼠为研究对象，在基础饲料中添加不同剂量甜菜碱，通过测定血脂水 ChemoaRractant 平、血清单核细胞趋化蛋白．1(Monocyte Protein．1，MCP．1)和肿 Necrosis 瘤坏死因子Q(TumorFactor-a,TNF．Ⅱ)水平及主动脉窦脂质斑块面积来 甜菜碱对apoE基因缺陷小鼠AS发生及TNF一Ⅱ甲基化的影响 中文摘要 探讨在没有高脂膳食等其他因素影响下甜菜碱对apoE基因缺陷小鼠AS发生发 展的影响，并从炎性因子TNF．a及其甲基化状态的改变，来探讨甜菜碱抗AS 可能的作用机制。为降低心血管疾病的发生率和死亡率提供新的药物或食物资 源，并为l临床营养防治AS提供新的途径。 研究耳的 本研究通过给apoE基因缺陷小鼠补充不同剂量的甜菜碱，研究甜菜碱在 AS发生和发展过程中所起的作用，并从TNF一Ⅱ基因CpG岛启动子甲基化状态 探讨甜菜碱作用的可能机制。 研究方法 1． 实验动物及分组 C57BL／6J小鼠作为研究对象，按体重随机区组法分为五个组：阴性对照组 (C57BL，6J小鼠)、阳性对照组、1％甜菜碱组、2％甜菜碱组和4％甜菜碱组。 阴性和阳性对照组饲以AIN一93饲料，l％、2％、4％甜菜碱组分别饲以添加1 ％、2％、4％甜菜碱的AIN-93饲料。所有实验小鼠放在层流架中分笼饲养，每 笼3～5只，自由摄食饮水，每周称体重，并记录进食量。0周时分别从apoE 基因缺陷小鼠和正常小鼠中随机抽取6只，饲养至第7周时每组随机抽取6只， 其余小鼠饲养至14周，所有小鼠做如下处理： 1．1经摘除眼球采血后处死小鼠，采集小鼠血液待凝固后离心分离血清，保存 于--40℃。 1．2分离心脏、肝脏、脾脏和肾脏用于脏器系数评价，并将肝脏冻存于一80℃。 1．3将心脏用10％的福尔马林液固定。 1．4分离主动脉，一80℃冻存。 2．检测指标及方法 2．1血清总胆固醇(total n 甜菜碱对apoE基因缺陷小鼠AS发生及TNF-tI甲基化的影响 中文摘要 cholesterol，LDL-c) 用酶法测定；低密度脂蛋白胆固醇(10wdensitylipoprotein 和高密度脂蛋白胆固醇olighdensitylipoproteincholesterol，HDL—C)水平用直 接法测定。 2．2 MCP-I和n师．Ⅱ水平的测定：ELISA法。 2．3小鼠主动脉窦脂质斑块面积：冰冻切片，油红O染色法。 2．4小鼠主动脉TNF-n基因甲基化的状态：甲基化特异