褪黑素对小鼠Lydig细胞睾酮合成的抑制作用及机制.pdfVIP

II 中文摘要 褪黑素对小鼠Leydig 细胞睾酮合成的抑制作用及机制 中文摘要 目的：观察褪黑素对Leydig 细胞睾酮合成的抑制作用，初步探讨褪黑素影响 睾酮分泌的作用机制。 方法：（1）采用Leydig 细胞原代培养模型，通过I 型胶原酶消化法分离C57BL/6J 小鼠睾丸间质细胞，以 400 （30μm ）目不锈钢网对小鼠睾丸间质细胞进行过滤、 纯化，对细胞进行台盼蓝染色，用 3β-羟基固醇脱氢酶 （3β-HSD ）特异性染色法 鉴定细胞，观察细胞形态学改变。（2 ）在培养的Leydig 细胞中加入不同浓度 (0， -6 -8 -10 -12 10 ， 10 ， 10 和10 mol/L) 的褪黑素或/和褪黑素受体拮抗剂Luzindole （1 μmol/L），作用 30min 后再加褪黑素，CCK-8 法检测细胞活性和增殖，流式细胞 仪检测细胞周期、线粒体膜电位和细胞活性氧 （reactive oxidative species，ROS ） 水平，ELISA 法检测睾酮水平。（3 ）将Leydig 细胞分为对照组、褪黑素处理组与 褪黑素/ Luzindole 联合作用组，免疫荧光法测定褪黑激素受体和睾酮合成相关基因 Mel1a ，GATA-4 ，StAR 和3β-HSD 的蛋白分布和表达。 结果 ：（1）体外培养的细胞形态呈梭形、增殖速度快、贴壁生长状态良好。 台盼蓝染色法显示，原代培养的Leydig 细胞存活率在 90% 以上。3β-HSD 特异性 染色后，可见多数细胞胞质呈蓝黑色。成功建立了小鼠Leydig 细胞的体外原代培 养模型。（2 ）与对照组相比，加入褪黑素后，Leydig 细胞增殖受到抑制，细胞培 养上清液中睾酮含量降低，细胞线粒体膜电位下降，活性氧水平增高。褪黑素对 Leydig 细胞睾酮合成的抑制作用可被褪黑素受体拮抗剂Luzindole 所阻断。（3 ）加 入褪黑素后，睾酮合成关键调节因子Mel1a 、 GATA-4 、StAR 和3β-HSD 的分布 与表达降低，该效应可被褪黑素受体拮抗剂Luzindole 阻断。 结论： 1、建立了Leydig 细胞原代培养模型，发现褪黑素可以抑制Leydig 细胞的增 殖，和睾酮的合成。 2 、褪黑素对睾酮合成的抑制作用可能是通过下调睾酮合成关键调节因子 Mel1a 、 GATA-4 、StAR 和3β-HSD 等实现的。 关键词： 褪黑素；Leydig 细胞；睾酮；雄性生殖 作 者：陈丽莉 指导教师：童建教授 II 褪黑素对小鼠Leydig 细胞睾酮合成的抑制作用及机制 英文摘要 Inhibitory effects and mechanism of melatonin on testosterone synthesis in mouse Leydig cells Abstract Objective: To observe inhibitory effect of melatonin on testosterone synthesis of Leydig cells, and to study funct