鼠疫双组分疫苗免疫学评价.pdfVIP

题目： 鼠疫双组分疫苗的免疫学应答 研究生：汪洁英 导 师：吴小南教授 摘 要 目的：本课题以提取的鼠疫F1 抗原和重组鼠疫V 抗原免疫小鼠，豚鼠两种 动物模型，评价鼠疫亚单位疫苗的免疫效果，为鼠疫疫苗研制奠定基础。 方法：1.在小鼠动物模型上，本课题用F1 和rV 与氢氧化铝进行物理混合后 免疫小鼠。通过脾淋巴细胞增殖实验、脾淋巴细胞细胞因子，流式细胞分析术和 抗体滴度的测定四种方法对 F1 和 rV 蛋白疫苗的免疫原性进行了初步评价。2. 在豚鼠动物模型上，实验采用不同剂量的 F1 和 rV 抗原与氢氧化铝佐剂进行物 理混合后免疫豚鼠，以探求合适的疫苗浓度；通过分离免疫后不同时间的外周血 单个核细胞进行增殖实验，对疫苗末次注射八周后的豚鼠进行过敏性迟发型超敏 反应实验，并测定免疫后不同时间抗体滴度等实验，对 F1 和 rV 蛋白疫苗的免 疫原性进行了评价。3. 在疫苗效力保护实验中，通过不同剂量的鼠疫双组分疫 苗免疫小鼠，并于一周后用一定剂量的鼠疫菌株对实验小鼠进行攻击，选择一定 的时间对小鼠脾脏的细菌进行培养计数，从而观察疫苗的保护效果。 结果：1.小鼠动物模型结果：ELISA 检测结果显示F1+rV+Al(OH)3 组有较强 的体液免疫应答；ELISPOT ，MTT 细胞增殖结果显示F1+rV+Al(OH)3 组在不同 时间点经F1 ，rV 抗原刺激后分泌 IFN-r 的脾脏淋巴细胞数均高于其余各组。2. 豚鼠动物模型结果：ELISA 检测结果显示各疫苗组均有较强的体液免疫应答，同 时活疫苗组对F1 抗原特异性的体液IgG 效价明显高于其余各组，结果具有统计 学意义。MTT 细胞增殖结果显示不同剂量的疫苗组F1+rV 组及活疫苗组在不同 时间点经F1 ，rV 抗原刺激后的增殖与阴性对照组无显著性差异；迟发型超敏反 应显示F1+rV 复合疫苗能介导较强的细胞免疫应答。3.疫苗效力保护实验结果显 示阴性对照组有数量不等的菌落生长，而疫苗组小鼠脾脏均无细菌生长。 5 结论：鼠疫双组分疫苗能引起小鼠和豚鼠明显的免疫应答，Al(OH)3 佐剂能 够显著提高其应答水平，同时对小鼠具有一定的保护力。确证了其与氢氧化铝佐 剂物理混合后能够激发高水平的免疫应答，为进一步研制新型鼠疫疫苗奠定了基 础 关键词：F1+rV 蛋白 体液免疫 细胞免疫 保护效力 6 Title: The immunological evaluation of the two-component plague vaccine Postgraduate: Wang Jieying Supervisor: Prof. Wu Xiaonan Abstract Objective: The topic of this experiment is to evaluate the plague subunit vaccine effect which is result from F1 +rV antigen in mice, guinea pigs two animal models , lay the foundation for the development of plague vaccine. Methods: 1. In mice animal models , this issue have used the mixture with the F1 , rV and aluminum