代谢综合征药物高通量筛选模型的建立.pdfVIP

2013 年 第 58 卷 第 4 期：321 ~ 328 《中国科学》杂志社 论 文 SCIENCE CHINA PRESS 代谢综合征药物高通量筛选模型的建立 ① ② ① ②* 陈冬妹 , 邱蓓颖 , 杨玲玲 , 李静雅 ① 华东师范大学生命科学学院, 上海 200062; ② 中国科学院上海药物研究所, 新药研究国家重点实验室, 国家新药筛选中心, 上海 201203 * 联系人, E-mail: jyli@ 2012-06-08 收稿, 2012-08-30 接受 国家自然科学基金、中国科学院创新药物研发网络(KSCX2-EW-R-15)和上海市科委公共服务平台项目(11DZ2292200)资助 摘要 线粒体对于真核细胞至关重要, 除了为细胞提供能量, 还参与细胞信号转导、分化与生 关键词 长、凋亡等生命过程. 许多疾病的发生与线粒体功能失常密切相关, 包括神经退行性疾病、糖 L6 肌管细胞 尿病、肥胖、肿瘤等. 由于线粒体膜电位是反映细胞功能状态的重要指针, 因此选用了代谢性 线粒体膜电位 细胞L6 大鼠肌管细胞建立了一种快速且高效地分析线粒体膜电位的高通量筛选模型. 通过对 高通量筛选 代谢综合征 线粒体染料JC-1 浓度及孵育时间、待筛选化合物孵育时间、阳性化合物CCCP (carbonylcyanide- m-chlorophenylhydrazone) 浓度等实验条件的优化, 确立了筛选条件, 并对鱼藤酮、丙二酸、抗 霉素 A 、寡霉素和黄连素(berberine)等线粒体抑制剂进行验证, 证实该筛选体系的可靠性. 以 −1 10 µmol L CCCP 作为阳性对照, 筛选体系的整体CV 值(变异系数)为5.92%, Z′因子为0.575, 符合高通量筛选的要求. L6 肌管细胞线粒体膜电位高通量筛选模型的建立, 将为发现治疗代 谢综合征的新药先导化合物提供更多机会. 线粒体是真核细胞最重要的细胞器之一, 是储 JC-1 (5,5′,6,6′-tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imida- 存和提供能量的场所、细胞生命活动所需能量的 carbocyanine iodide)是线粒体膜电位的特异性荧光染 80% 由线粒体供给. 由于线粒体与许多疾病的发生发 料, 可用于多种类型细胞的检测, 包括肌肉细胞、神 展密切相关, 包括糖尿病、癌症、神经退行性疾病 经细胞等, 同样也可以检测组织和分离的线粒体. 它 [1,2] [3] 是一个带正电荷的亲脂性化合物, 在单体的情况下 等 , 因此线粒体已日益成为研究热点 . 线粒体 膜电位为维持线粒体功能和细胞存活所必需, 能够 呈现绿色荧光, 聚合体的情况下呈现红色荧光. 最后 最直接地衡量线粒体的能量状态及其功能, 与线粒 以红光与绿光的比值反映线粒体的膜电位状态, 这 体内钙离子平衡、ATP 生成、代谢物及蛋白质转运和 一比值不受其他因素(如线粒体大小、形状及密度等) 活性氧的生成相关[4,5]. Peter 的化学渗透学说认为, 需 的干扰. JC-1 较罗丹明等其他线粒体染料的优势是可 氧细胞内糖类、脂质、氨基酸等通过各自的分解途径 以检测到随膜电位升高荧光由绿色逆转回红色的过