犬小孢子菌SS文库中差异基因的研究.pdfVIP

犬小孢子菌SSH文库中差异基因的研究 硕士研究生： 张渊 指导教师： 杨国玲教授 指导小组： 杨国玲教授 张振颖医师 专业名称： 皮肤病与性病学 摘 要 目的：犬小孢子菌是一种可侵犯人和动物皮肤、毛发、甲的真菌， 其突出的生物学特点是嗜角质性，引起皮肤的浅部感染。它不是机会性 致病菌，而是真正感染健康机体的致病菌。随着人们生活水平的提高， 猫狗等宠物与人类接触的增加导致犬小孢子菌病逐年增加，特别是犬小 孢子菌所致脓癣例数急剧增加。有证据显示分泌性活性蛋白酶在它们侵 入性方面扮演了重要的角色，然而除蛋白酶以外的因子与头癣的相关性 及在头癣中的发病机制尚无报道。先期试验已经从不同的诱导培养基中 培养出犬小孢子菌，即儿童头皮组织诱导培养基菌株(tester)；儿童光 滑皮肤组织诱导培养基菌株(driverl)；成人头皮组织诱导培养基菌株 subtractive 验就差异文库的进一步筛选及对获得的差异基因进行功能及定量分析， 为下一步探讨差异基因在头癣发病机制中的作用及在豚鼠感染模型中的 研究做出一些探索。 方法： 1． 性克隆筛选。 2． of of 同源簇数据库(Clusters OrthologousGroupsproteins，COG)上进行同 源序列分析。 3． 利用实时PCR对差异基因进行定量检测。 结果： 1． 斑点杂交后共得到11O个阳性克隆。 2． 阳性克隆的测序：SSHl文库得到了62个有效序列，SSH2文库 得到了44个有效序列。数据库的分析：去除混杂基因(与人基因同源性 3个EST， 98％，线性分数=200；与真菌基因线性分数40)后，共得到1 其中5个为未知新序列，可能代表了tester特异表达的新基因，8个找到 了同源基因，其中6个具有功能分类。 3． RNA池中表达量的44．6倍和117倍； RNA池中的表达量分别为driverl SSH2文库中的P．GAL4和NADHl基因在testerRNA池中的表达量分别 为driver2RNA池中表达量的78．2倍和9．8倍。 结论： 1． 在SSH resistanceMDR、RINGzinc zinc protein fingerprotein和RINGfinger RNA Isubunit。 和DNA—directed polymerase 2． FSHl和PQ．LRP基因在儿童头皮组织诱导培养基菌株中相对于儿 童光滑皮肤组织诱导培养基菌株中的上调表达表明，这2个基因在犬小 孢子菌感染头皮组织中具有重要作用，可以作为犬小孢子菌致头癣的分 子机理继续研究。 成人头皮组织诱导培养基菌株中的上调表达显示，这2个基因可能与犬 小孢子菌更易于感染儿童有关，可以作为研究犬小孢子菌致病性的候选 基因。 关键词：犬小孢子菌 消减eDNA文库基因表达 实时PCR 2 from genes 011differentiallyexpressed Study