L-酪氨酸甲酯消旋及Alcalase 2.4L催化对映选择性水解制备D-酪氨酸.pdfVIP

　第２７卷 第３期 分　　子　　催　　化 Ｖｏｌ．２７，Ｎｏ．３　 　２０１３年６月 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＭＯＬＥＣＵＬＡＲＣＡＴＡＬＹＳＩＳ（ＣＨＩＮＡ） Ｊｕｎ．　２０１３　 文章编号：１００１３５５５（２０１３）０３０２１２０６ Ｌ酪氨酸甲酯消旋及Ａｌｃａｌａｓｅ２．４Ｌ催化对映选择性水解 制备Ｄ酪氨酸 徐红梅，何从林，夏仕文 （重庆邮电大学 生物信息学院，重庆４０００６５） 摘要：提出了一个５硝基水杨醛催化Ｌ酪氨酸甲酯消旋化的新方法并推测了Ｌ酪氨酸甲酯的消旋机理．在乙腈／ 磷酸盐缓冲液（ｐＨ７．５）中，５硝基水杨醛催化 Ｌ酪氨酸甲酯消旋为 ＤＬ酪氨酸甲酯，消旋率 １００％，消旋收率 ９３％．优化了Ａｌｃａｌａｓｅ２．４Ｌ催化ＤＬ酪氨酸甲酯对映选择性水解的反应条件．３０℃下，在叔丁醇／磷酸盐缓冲液 （ｐＨ７．５）中，Ａｌｃａｌａｓｅ２．４Ｌ催化ＤＬ酪氨酸甲酯对映选择性水解为Ｌ酪氨酸和Ｄ酪氨酸甲酯．在酶催化水解过程 中，Ｌ酪氨酸形成沉淀，容易通过简单的过滤进行分离．Ｄ酪氨酸甲酯在碱性条件下水解为 Ｄ酪氨酸，收率 ９１％，ｅｅ９７％． 关键词：消旋；ＤＬ酪氨酸甲酯；Ａｌｃａｌａｓｅ２．４Ｌ；对映选择性水解；Ｄ酪氨酸 中图分类号：Ｑ８１４．１；Ｏ６４３．３ 文献标志码：Ａ 　　Ｄ酪氨酸是一种非蛋白源氨基酸，是多肽药物 （９５∶５，ｖ／ｖ）或乙腈／水（４∶１，ｖ／ｖ）体系中，组合 － ［１３］ ［１０］ ［１１］ 和抗肿瘤手性药物的重要中间体 ．例如，以Ｄ 吡哆醛５磷酸 、吡啶２甲醛 、３，５二氯水杨 ［１２］ 酪氨酸为手性中间体合成的多肽药物阿托西班是一 醛 催化 Ｄ酪氨酸苄酯的原位消旋和 Ａｌｃａｌａｓｅ 种保胎药．Ｄ酪氨酸的制备方法主要有优势结晶 ２．４Ｌ催化Ｌ酪氨酸苄酯的对映选择性水解，实现了 法、化学拆分法、生物拆分法、微生物转化法等． ＤＬ酪氨酸苄酯的动态动力学拆分，Ｌ酪氨酸收率分 ［４］ 别为 ９５％、６３％、９５％，ｅｅ分别为 ９７％、＞９８％、 彭阳峰等 报道了通过 ＤＬ酪氨酸甲酯与 Ｄ酒石 酸形成二酪氨酸甲酯酒石酸盐制备 Ｄ酪氨酸的方 ９９％．这些动态动力学拆分方法适合制备高光学活 ［５］ 法，收率２６％，ｅｅ９９％．Ｔａｋａｈａｓｈｉ等 以Ｐｒｏｔｅｕｓ 性Ｌ酪氨酸，不能用于Ｄ酪氨酸的有效制备． ｖｕｌｇａｒｉｓ细胞为生物催化剂，通过选择性降解ＤＬ酪 我们首先以Ｌ酪氨酸为原料形成 Ｌ酪氨酸甲 氨酸中的Ｌ酪氨酸制备 Ｄ酪氨酸，收率２９．９％， 酯，以５硝基水杨醛为催化剂在温和条件下催化Ｌ ｅｅ９９．５％． 酪氨酸甲酯消旋为ＤＬ酪氨酸甲酯．在此基础上以 Ａｌｃａｌａｓｅ２．４Ｌ是一种廉价的碱性蛋白酶，其主 Ａｌｃａｌａｓｅ２．４Ｌ为催化剂，在叔丁醇／水单相体系中 要酶组分为丝氨酸型枯草杆菌蛋白酶，在食品工业 催化ＤＬ酪氨酸甲酯对映选择性水解为Ｌ酪氨酸和 中用于蛋白质水解．除了蛋白质水解活性外，Ａｌｃａ Ｄ酪氨酸甲酯，后者在碱性条件下水解为Ｄ酪氨酸 ｌａｓｅ２．４Ｌ亦具有酯酶活性，在有机溶剂中具有高活 （图示１）． － 性和稳定性［６ ７］，能催化 ＤＬ氨基酸酯或 ＤＬＮ保 １实验部分 护氨基酸酯