hplc同时测定炮制前后黄芪中4种异黄酮含量.docVIP

编号： AXH23 第26届英特尔上海市青少年科技创新大赛 青少年科技创新项目论文报告 项目名称：黄芪中4种异黄酮炮制前后的含量测定及其科学性探讨 研究时间： 2010 年 8 月至 2011 年 2 月 论文报告中不得出现项目作者、辅导教师、学校、校外辅导人员、指导专家及以往获奖、专利等内容。 黄芪中4种异黄酮炮制前后的含量测定及其科学性探讨 黄芪（Astragali Radix）为我国传统中药材，是豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fish．)Bge．var．mongholicus(Bge．) Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fish．)Bge．的干燥根。其味甘，性温，归肺、脾经，具有补气固表、利尿托毒、敛疮生肌之功效。炙黄芪是黄芪的炮制品，经加入炼蜜拌炒后制得，具有补中益气的作用，主要用于气虚乏力，食少便溏[1]。异黄酮类成分为黄芪和炙黄芪中有效成分之一，有抗病毒、抗菌、降血脂、抗氧化作用[2]。研究还发现异黄酮类化合物对血管内皮细胞凋亡具有抑制作用[3]。本小组在对炮制前后化学成分的中发现，在炮制后的中可能与的含量有关。β-D-葡萄糖苷（Ⅰ），芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷（Ⅱ），毛蕊异黄酮（Ⅲ），芒柄花素（Ⅳ）为检测指标。运用甲醇-水为流动相，建立测定炮制含量的方法，为的质量标准提供简便快捷的分析方法。1.0 mL/min。检测波长：251nm；柱温：40℃；进样量：10 (L。在上述色谱条件下，取同一混合对照品溶液10 (L连续进样3次，记录色谱图。 2.2 对照品溶液制备 精密称取对照品6.3mg（Ⅰ），4mg（Ⅱ），4.5mg（Ⅲ），5mg（Ⅳ），置于10ml容量瓶中，用甲醇充分溶解，并稀释至刻度，得对照品贮备液。 2.3 供试品溶液制备 称取黄芪药材粉末约1.5g，加甲醇50 ml．回流提取45 min，重复提取2次，合并提取液浓缩至干，加甲醇溶解并定容于10 ml容量瓶中，摇匀，经0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。 2.4 系统适应性实验 按“2.1”项色谱条件，分别10μL对照品溶液和样品溶液进样，色谱图见图。在该实验条件下，的保留时间为1min（Ⅰ），相邻峰的分离度为1.5，理论塔板数大于000。 图1 HPLC色谱图 A.异黄酮对照品B.黄芪供试品C.炙黄芪供试品 Ⅰ、毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷 Ⅱ、芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷 Ⅲ、毛蕊异黄酮 Ⅳ、芒柄花素 2.5 标准曲线的制备 精确量取“2.2”项下对照品溶液0.10.4、0.8、2和5mL，分别置于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，即得一系列浓度的对照品溶液。按“2.1”项色谱条件，精密吸取以上对照品溶液10 (L注入高效液相色谱仪进行测定，以峰面积(Y)与进样浓度(g/L)(X)作图得标准曲线，数据经回归分析，得的回归方程：Y = 28407X + 9111.2(r= 0.9995, n=6)，线性范围为~630 mg/L。Y = 32425X + 56966(r= 0.9995, n=6)，线性范围为~400 mg/L。（Ⅲ）Y = 42191X + 76895(r= 0.9996, n=6)，线性范围为~450 mg/L。（Ⅳ）Y = 52635X + 188801(r= 0.9997, n=6)，线性范围为~500 mg/L。 2.6 精密度试验 按“2.2”项下方法制备对照品溶液，重复进样5次，每次10 (L，测定的峰面积RSD值，表明本法精密度良好，符合含量测定要求。 2.7 稳定性试验按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别于0，2，4，8，12 h进样，每次进样10 (L，测定的峰面积，计算RSD值为，表明供试品溶液中在12 h内基本稳定。 2.8 方法重现性试验精密称取同一批样品各g，5份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取各供试液10 (L，测定面积，计算RSD值为 (n=5)，表明用此方法测定这黄酮的含量重现性良好。 2.9 加样回收率试验称取6份已测知含量的样品各g，分高中低三种浓度分别精确加入“2.2”项下对照品溶液.0、.0、.4、.4、2.0、2.0mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取上述溶液10 (L注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定的含量，平均回收率(n=6)为。 “2.3”项下所述方法制备样品溶液。精密吸取供试品溶液10 (L，进样分析，结果见表1。 表1不同产地黄芪、炙黄芪含量测定结果(mg/g) 产地 毛蕊异黄酮苷 芒柄花苷 毛蕊异黄酮 芒