食品中叶酸.docVIP

前 言 本标准代替GB/T 5009.211-2008《食品中叶酸的测定》。 本标准与GB/T 5009.211-2008相比，主要变化如下： ——修改了菌种名称,由干酪乳杆菌改为鼠李糖乳杆菌； ——删除了培养基和用于叶酸盐降解的鸡胰腺供货信息。 本标准中附录A、B均为资料性附录。（本标准中附录性质的说明） 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： ——GB/T 5009.211-2008。 食品安全国家标准 食品中叶酸（叶酸盐）的测定 范围 本标准规定了食品中叶酸（叶酸盐）的测定方法。 本标准适用于食品中叶酸（叶酸盐）的测定。 原理 叶酸是细菌生长所必需的营养素，在一定控制条件下，细菌的生长响应与培养基中叶酸含量呈线性关系。用比浊法测定试样液中细菌增殖后的混浊度，通过与标准曲线相比较计算出试样中叶酸的含量。 试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。 甲苯（C7H8）。 磷酸钠（Na3PO4·12H2O）。 磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O）。 抗坏血酸（C6H8O6）。 无水乙醇（C2H6O）。 氢氧化钠（NaOH）。 盐酸（HCl）。 鸡胰腺（Chicken Pancreas）。 木瓜蛋白酶（Papain）。 淀粉酶（Taka-Diastase）。 叶酸（C19H19N7O6）：纯度＞98 %。 葡萄糖（C6H12O6）。 蛋白胨（peptone）。 酵母提取物（yeast extract）。 琼脂。 磷酸氢二钾（K2HPO4）。 磷酸二氢钾（KH2PO4·3H2O）。 硫酸镁（MgSO4·7H2O）。 氯化钠（NaCl）。 硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）。 硫酸锰（MnSO4·H2O）。 溴麝香草酚蓝（C27H28Br2O5S）：指示剂。 磷酸缓冲液（0.05 mol/L，pH 6.8）：分别称取4.35 g 磷酸钠（4.2）和10.39 g磷酸氢二钠（4.3），用水溶解至1 L。临用前按大约5 g/L的比例加入抗坏血酸（4.4），使pH值为6.8。 乙醇溶液（1+4）：量取200 mL乙醇（4.5）与800 mL水混匀。 氢氧化钠乙醇溶液（0.01 mol/L）：称取0.4 g氢氧化钠（4.6）用乙醇溶液（1+4）（4.24）溶解并稀释至1000 mL。 氢氧化钠溶液（1 mol/L）：称取4 g氢氧化钠（4.6），加水溶解并稀释至100 mL。 盐酸溶液（1 mol/L）：吸取8.4 mL盐酸（4.7），用水稀释至100 mL。 鸡胰腺液：称取100 mg鸡胰腺（4.8），加入20 mL磷酸缓冲液（4.23），研磨至匀浆。现用现配。 蛋白酶-淀粉酶液：分别称取200 mg木瓜蛋白酶（4.9）和淀粉酶（4.10），加入20 mL磷酸缓冲液（4.23）研磨至匀浆。现用现配。 叶酸标准储备液（20.0 (g/mL）：精确称取20.0 mg叶酸（4.11）置于1 L容量瓶中，用氢氧化钠乙醇溶液（4.25）溶解并定容至刻度。储存于棕色瓶中，2℃～4℃冰箱保存2年。当叶酸（4.11）纯度不够或储存时间超过半年以上时需按附录A进行浓度标定后再使用。 叶酸标准中间液（20.0 ng/mL）：准确吸取1.00 mL 叶酸标准储备液（4.30））置于1 L容量瓶中，用氢氧化钠乙醇溶液（4.25）稀释并定容至刻度，混匀后储存于棕色瓶中2℃～4℃冰箱保存1年。 叶酸标准工作液（0.200 ng/mL）：临用前吸取1.00 mL叶酸标准中间液（4.31））置于100 mL容量瓶中，用水稀释定容至刻度。临用前现配。 甲盐溶液：分别称取25 g磷酸氢二钾（4.16）和25 g磷酸二氢钾（4.17），加水溶解并稀释至500 mL。加入3滴~5滴甲苯，2℃~ 4℃冰箱可保存1年。 乙盐溶液：分别称取10 g硫酸镁（4.18）、0.5 g氯化钠（4.19）、0.5 g硫酸亚铁（4.20）和0.5 g硫酸锰（4.21），加水溶解并稀释至500mL。加5滴盐酸（4.7），2℃~ 4℃冰箱保存1年。 溴麝香草酚蓝溶液：称取0.1 g溴麝香草酚蓝（4.22）于研钵中，加1.6 mL 0.1 mol/L氢氧化钠溶液研磨，加少许水继续研磨至完全溶解，用水稀释至250 mL。此指示剂变色终点为草绿色（pH 6.8）。 基础培养液：可按附录B配制叶酸测定用基础培养液，也可直接由试剂公司购买叶酸测定培养基干粉（folic acid casein medium），用前根据需要量按说明书配制。效力相当。 菌种储备用琼脂培养基：按表1各成分用量称取或吸取混合后，加水至100 mL，沸水浴加热至琼脂完全溶化。趁热以溴麝香草酚蓝为外指示剂，用1 mol/L盐酸溶液（4.27）调节pH至指示剂呈草绿色，如过量用1 mo