天然药化糖与苷_new资料.pptVIP

* * * (六)糖醛酸苷的选择性水解 用普通裂解方法难开裂 加剧反应条件，易造成糖元和苷元的破坏 特殊方法： (1) 光分解法：用500W高压汞灯照射皂苷，使糖醛酸苷键裂解，释放苷元或次生苷。 (2) 四醋酸铅-醋酐法：用于葡萄糖醛酸的裂解; (3) 醋酐-吡啶分解法：只能裂解多聚糖的葡萄糖醛酸皂苷。 (4) 微生物培养法 七、糖的提取分离 ㈠提取 主要为溶剂法——水、稀醇（单糖、低聚糖、多糖） 苷类分子的极性随着糖基的增多而增大。可根据其极性大小，来选择相适应的溶剂。 破坏或抑制植物体内酶的方法： 采集新鲜材料——迅速加热干燥——冷冻保存等 ㈡分离 1．活性炭柱色谱——分离水溶性物质较好 如：氨基酸、糖类及某些苷类。 活性炭对物质的吸附规律 对分子量大的化合物吸附力大于分子量小的化合物，即：多糖 单糖 活性炭在水溶液中的吸附力最强，在有机溶剂中吸附力较弱。洗脱顺序： H2O、10%、20%、30%、50%、70%乙醇液 无机盐 →二糖 →三糖 →多糖 单糖 2．纤维素色谱 原理与PC相同，属分配层析。 溶剂系统：水、丙酮、水饱和的正丁醇等。 出柱顺序：水溶性大的先出柱，水溶性差的后出柱 3．离子交换柱色谱 ①除水提液中的酸、碱性成分和无机离子； ②制成硼酸络合物——强碱性阴离子交换树脂（不同浓度硼酸盐液洗脱） 4．季铵氢氧化物沉淀法——酸性多糖的分离 季铵氢氧化物是一类乳化剂。 PH9 ; 不加硼砂缓冲液 5．分级沉淀或分级溶解法 在糖的水溶液中，逐步加入乙醇，即逐渐增大EtOH浓度，可得到各部分的沉淀物。 为使多糖稳定，多糖通常在pH=7时进行 酸性多糖在pH=2~4时进行 处理酸性多糖时，为防酸水解苷键，操作宜迅速。 6．蛋白质除去法 用分级沉淀法得到的多糖，常夹杂有较多的蛋白质，为除之，通常选择能使蛋白质沉淀剂来处理 如：酚、三氯乙酸、鞣酸等。 注意：处理时间要短，温度要低。 （避免多糖降解） 八、糖的鉴定和糖链结构的测定 ㈠糖的鉴定 1．纸层析 展开系统：常用水饱和的有机溶剂展开。 显色剂：邻苯二甲酸＋苯胺 硝酸银试剂(使还原糖显棕黑色) 三苯四氮唑盐试剂（单糖和还原性低聚糖呈红色） 3,5-二羟基甲苯盐酸试剂（酮糖呈红色） 2．薄层层析 吸附剂：硅胶 显色剂：除纸层析应用的以外，还用如： H2SO4/H2O或乙醇液 茴香醛-硫酸试剂 苯胺-二苯胺磷酸试剂 等 3．气相层析 将糖制备成三甲基硅醚（增加其挥发性） 将醛糖用NaBH4还原成多元醇（避免形成端基异构体）制成乙酰化物或三氟乙酰化物。 4．液相色谱 填充材料——化学修饰的硅胶 优：不必制备成衍生物。适合分析对热不稳定、不挥发的低聚糖和多糖。 分析单糖和低聚糖，其灵敏度不及气相层析。 ㈡糖链结构的测定 主要解决的问题——单糖的组成、糖之间的连接位置和顺序、苷键构型 研究糖链结构的一般顺序： 1．纯度鉴定 2. 分子量的测定 3. 单糖的鉴定 4．单糖之间连接位置的决定 5．糖链连接顺序的决定 6．苷键构型的决定 3．单糖的鉴定 低聚糖、多糖的结构分析，首先要了解由哪些单糖所组成，各种单糖之间的比例如何。 一般是将苷键全水解 用PC、TLC 、GC检出单糖的种类——定性 显色后用薄层扫描仪求得各种糖的分子比——定量 观察1H-NMR谱或13C-NMR谱中端基质子 或端基碳的信号数目 可用GC或HPLC对单糖定性定量。 4．单糖之间连接位置的决定 ①化学方法: 糖链先进行全甲基化,再进行甲醇解，可得未完全甲基化的单糖，鉴定未全甲基化的单糖中游离羟基所在位置，即糖与糖之间的连接位置，全甲基化的单糖一定是连接在糖链最末端。 ②13C-NMR测定：主要归属各碳信号，以确定产生苷化位移的碳。 5．糖链连接顺序的决定 ①缓和水解法：将糖链水解成较小的片段，然后分析这些低聚糖的连接顺序。 ②质谱分析 6．苷键构型的决定 ⑴分子旋光差（klyne法） ⑵酶催化水解方法 ⑶1H-NMR判断糖苷键的相对构型 ⑷其它 ⑴分子旋光差（klyne法） 据经验公式计算，测得苷与苷元旋光度，计算出比旋度[M]D △ [M]D ＝ [M]D 苷－ [M]D 苷元 △ [M]D与组成该苷的糖的一对甲苷的分子