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机能学实验设计大纲 实验名称: 褪黑素对大鼠重症急性胰腺炎肾脏损伤的保护作用及机制研究 课题来源：自选 设计班级：2011级生物技术本科班 设计人员：周阳 设计日期：2013年7月2日 指导老师：杨拯 成都医学院实验技术教研室 2013年制 一、实验设计的目的意义：实验设计的目的意义，国内外研究现状，存在的问题，解决问题的思路。 目的与意义:：探讨褪黑素(melatonin，MT)在大鼠重症急性胰腺炎相关肾脏损伤发病机制中的作用。大鼠重症急性胰腺炎相关肾损伤发病过程可能与脂质过氧化引起肾脏细胞凋亡有关，褪黑素可能通过抗氧化作用对肾脏损伤起保护作用。为临床上治疗重症急性胰腺炎相关肾脏损伤用药提供一种新思路，具有十分重要的意义。 国内外研究现状： 重症胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)发病急骤，病程复杂，并发症涉及全身各脏器，有文献报道SAP并发急性肾损害(acute kidney injury，AKI)的发生率高达53．9％，如进展为急性肾衰竭则病死率高达50% 。AKI是SAP独立死亡危险因素，研究发现，体内产生的大量炎性介质、细胞凋亡及微循环障碍等因素可能在SAP引起AKI的发病机制中起着重要作用[1]。SAP相关性肾损伤的机制目前仍不清楚。一般认为， SAP相关性肾损伤的主要原因是有效循环血容量不足、血流动力学改变导致肾脏缺血。但蔡佳等[2]研究后认为，有效血容量减少或血压降低不能作为判断急性胰腺炎合并肾功能衰竭的依据，相反，对于血压正常的患者更不能放松警惕。近期的研究结果显示：SAP相关性肾损伤是由于免疫或毒素的应激引起的急性肾小管细胞凋亡、肾小管上皮细胞屏障功能丧失和内皮细胞功能紊乱等导致的，而不是简单的由血流动力学紊乱引起。蔡治方等人用清胰Ⅱ号颗粒剂对大鼠重症急性胰腺炎合并肾损伤时的保护作用做了研究，得出清胰Ⅱ号颗粒剂治疗的作用机制可能是：①对SAP 早期和后期的TNF的升高均有明显的抑制作用，进而可阻断由其触发的一系列炎症连锁反应，防止SAP的级联放大及瀑布效应；②有通里攻下的功能，增加胃动素的分泌，提高胃肠蠕动功能，促进肠内毒物的排泄，减轻内毒素血症，阻止其触发的瀑布样级联反应，减轻肾间质组织细胞的损害；③进而减少炎症介质对内皮细胞的刺激作用。 存在的问题：，SAP是由多种因素参与的复杂的病理生理过程．各因素之间既相互独立又相互渗透，共同促进SAP的发生和进展。SAP引起肾脏损害的机制尚未完全清楚．而脂质过氧化引起细胞凋亡对肾功能的影响不容忽视。MT具有靶向拮抗作用，如能在SAP早期应用MT，无疑对SAP发生进展具有干预作用。此外，MT对人体的毒理作用也未见报道，不良反应少。虽然将MT应用于SAP的治疗方案目前仍处于动物实验阶段，但为临床攻克这一顽症提供了新的策略和思路。 解决问题的思路：通过建立大鼠试验模型，测定血清AMY，Cr和肾组织匀浆中MDA，MPO含量，探讨褪黑素(Me1)对SAP时肾损伤的治疗作用。 参考文献： [1] 陈舜杰，蒋更如．重症急性胰腺炎肾脏损伤的发生机制．内科急危 重症杂志，2011，17：72-73． [2]蔡佳，罗和生，丁一娟．急性重症胰腺炎并发急性肾功能衰竭7例 临床分析．临床消化病杂志，2003，15：219—220. [3]赖铭裕，梁志海，唐国都，等。腹腔注射左旋精氨酸诱导急性坏死性胰腺炎大鼠模型[J]·世界华人消化杂志，2006, 14(22)：2 233-2 236. [4]CHO C H,MEI Q B ,SHANG P ,et al.Study of the gastrointestinal protective effects of polysaccharides from angelica sinesis in rats [J].Planta Med,2000,66（4）：348. 二、实验设计方案（实验设计目标,拟解决的主要问题, 实验动物设计,实验专业设计，实验统计设计,实验方法设计，可行性分析,预期结果，实验设计工作时间安排）。 （一）实验设计目标，拟解决的关键问题 设计目标：本研究拟通过观察动物模型中氧自由基和炎症细胞的变化及肾脏组织形态学的改变，探讨褪黑素对SAP时肾损伤的治疗作用。 拟解决的关键问题：实验模型的制备。对血清AMY，Cr和肾组织匀浆中MDA，MPO含量的结果分析。 （二）实验设计 1、实验动物设计 我们选用大鼠作为实验动物，有以下几点理由： 1）、大鼠易得到，容易饲养，在科研工作中被广泛利用。 2）、大鼠肾相对较大，易于得到样品。 2、实验专业设计 选用大鼠作为实验动物，腹腔注射6％L一精氨酸溶液，建立动物模型，T组注射L一精氨酸，分别测血清AMY，Cr和肾组织匀浆中MDA，MPO含量，以