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模型制作论文数学模型论文 【摘要】 目的 急性脊髓损伤后大鼠脊髓横断面神经原的变化 用组织化学和图象分析方法观察大鼠脊髓细胞的变化 大鼠脊髓神经原细胞免疫反应发生变化(P0.01) 尼氏染色及电镜观察说明继发性脊髓损伤大鼠模型制备成功 【关键词】 继性损伤;脊髓;大鼠 急性脊髓损伤后开始时常为不完全性,最后结果常为两种损害机制引起:原发性脊髓损伤和继发性脊髓损伤(SSCI),原发性损伤包括机械压迫,无法针对其损伤机制进行有效的治疗,使最初病灶周围原来完整的组织发生自身破坏性病变,周围神经功能损害逐渐发展[1]? 1 资料与方法 1.1 实验材料 雄性Wistar大鼠 中国医科大学动物室提供 1.2 实验动物分组 本实验选用雄性健康Wistar大鼠40只,体重260~300 g,随机分成二组:20只:20只 1.3 实验方法 1.3.1 继发性脊髓损伤大鼠模型制备 1%戊巴比妥钠腹腔麻醉动物(30 mg/kg),俯卧位固定于立体定位仪上T10为中心暴露上下位锥板,咬除锥板,保持硬脊膜完整T10阶段节段脊髓表面垫一曲度与脊髓表面一致的3 mm×8 mm塑料片,用30 g重物垂直压迫T10节段脊髓10 min,逐层缝合肌肉皮肤:压迫时身体痉挛性颤动;压迫后硬脊膜内充血或水肿,双下肢呈迟缓性瘫痪,斜板实验测定最大角度小于30度,4%多聚甲醛灌注固定,无菌条件下取损伤节段脊髓组织约1.0 cm,液氮保存或石蜡包埋 1.3.2 组化标本制备 对实验动物用1%戊巴比妥钠(40 ml/kg)腹腔麻醉后开胸,经左心室70滴/min滴入1%肝素钠的生理盐水500 ml,同时剪开右心耳0.1M磷酸盐缓冲液(PBS,pH=7.4)配制的固定液(含4%多聚甲醛)灌流固定,放入含4%多聚甲醛PBS的固定液中进行后固定大约2 h,之后将实验动物的脊髓组织切成薄片移入含20%蔗糖的PBS中4℃冰箱中存放,至组织薄片沉底,经水包埋,恒冷箱连续横切片,片厚20μmOCT包埋,恒冷箱连续切片,片厚16 μm,70℃保存备用 1.3.3 尼氏染色 冰冻切片吹干,经PBS漂洗5 min×3次,将切片置入1%甲苯胺蓝溶液中37℃孵育90 min,取出后用蒸馏水冲洗,PBS漂洗5 min×3次,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片,光镜下观察 1.3.4 透射电镜技术 各组动物在1%戊巴比妥钠(40 mg/kg体重)腹腔麻醉下,用含1%肝素钠生理盐水200 ml快速冲洗后,用2%多聚甲醛及2.5%戊二醛的0.1M磷酸缓冲液250 ml灌流固定,灌流后立即取脊髓,组织块置于4℃,2.5%戊二醛中固定24 h,经1%锇酸固定1 h后,常规脱水,Epon812包埋,L.K.B超薄切片,醋酸铀,日立H600透射电镜观察并拍片 2 结果 2.1 尼氏染色结果及电镜结果 正常对照组大鼠脊髓细胞的尼氏染色切片上,神经元数量较多,排列紧密,形态完整,泡浆有内尼氏体 实验组大鼠脊髓,肉眼可见大鼠脊髓损伤局部组织充血SCCI后3~6 h损伤局部神经元核固缩,胞体缩小,胞质深伊红染色,成为红色是神经元1~3 d,轴突肿胀,出现空泡,白质内神经髓鞘散乱3~7 d胶质细胞增生明显,可见卫星现象及鬼影细胞14 d,损伤段脊髓变细部分灰质崩解坏死,可见囊腔形成,细胞丰满,泡浆内尼氏体丰富 根据尼氏染色及电镜观察说明继发性脊髓损伤大鼠模型制备成功 3 讨论 神经损伤的继发性损害因素是一种细胞和分子水平的主动调节过程,其演变过程达数小时之久,具有可逆性且可被控制,缺乏侧枝循环,对缺氧耐受性差,一旦损伤,局部血管痉挛,脊髓的血液动力学,并相互影响,形成恶性循环,病理上表现为脊髓缺血,继而液化 研究表明,脊髓的缺血缺氧几乎在伤后立即出现[2]有以下几种[3]:①损伤区缺乏侧支循环;②微血肿压迫周围组织和微血管;③微血栓形成;④微动脉痉挛;⑤由于各种原因引起的组织和细胞水肿;⑥各种原因引起的髓内压上升,使损伤脊髓出现局部血流量下降和组织缺氧,共同造成了脊髓原发性损伤后的进一步损害,使原本存在生机的神经细胞走向死亡或凋亡的结局 继发性脊髓损伤大鼠模型制备成功,对临床治疗继发性脊髓损伤提供了可靠实验室依据 参 考 文 献 [1] Shoshani T,Faerman A,Mett I,et al.Identification of a novel hypoxiainducible factor 1responsive gene,RTP801,involved in apoptosis.Mol Cell Biol,2005,22(7) [2] Wa