人组蛋白α-氨基乙酰基转移酶Nat11表达纯化、晶体生长及其底物结合的研究.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期 2014 11 人组蛋白 α-氨基乙酰基转移酶 Nat11 表达纯化、晶体 生长及底物结合研究 黄嘉欣  李海涛 （清华大学医学院基础医学系，北京 100086） 摘 要 ： α-氨基乙酰基转移酶 11（Nat11）催化组蛋白H4 和H2A 氨基端乙酰化修饰，发挥着重要的表观遗传调控功能。将 人Nat11 基因构建到原核表达载体pSUMO 中，转化入大肠杆菌BL21（DE3）进行重组表达。通过镍柱亲和层析等一系列体外纯化 步骤，获得高纯度Nat11。利用等温滴定量热法 （ITC），测得Nat11 与底物多肽微摩尔量级结合常数。利用质谱技术，发现纯化后 的Nat11 结合有大肠杆菌内源产生的乙酰辅酶A 或辅酶A，在ITC 滴定过程中可以产生对多肽底物的乙酰化修饰，表明纯化获得 的Nat11 在溶液中具有酶活力。随后，对Nat11 进行晶体生长研究，通过初筛优化获得蛋白截短体及底物-酶融合蛋白单晶。 关键词 ： α-氨基乙酰基转移酶 11 重组蛋白表达 蛋白聚集 酶-底物结合 晶体生长 ， Expression Crystallization and Substrate Binding Studies of Human - Histone N terminal Acetyltransferase Nat11 Huang Jiaxin Li Haitao （ ， ， ， 100086 ） Department of Basic Medical Sciences School of Medicine Tsinghua University Beijing Abstract: The alpha-amino groups of histones H4 and H2A can be acetylated by histone N-terminal acetyltransferase 11（Nat11）, which plays an important role in epigenetic regulation. The cDNA of human Nat11 was amplified and cloned into pSUMO vector. The resultant construct was transformed into E.coli strain BL21（DE3）for recombinant protein expression. Homogenous Nat11 was highly purified through a series of purification procedures including nickel column affinity chromatography. Using isothermal titration calorimetry（ITC）, we measured micromolar binding constants between Nat11 and histone H4 peptides. MALDI-TOF mass spectrometry analysis revealed that purified Nat11 wa