Ezrin多克隆抗体制作及其应用.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期 2013 1 Ezrin 多克隆抗体制作及应用 张宏玲  万骏  严飞  张新胜  曹威  陶伟  黄来强 （1. 清华大学生命科学学院，北京 100084 ；2. 清华大学深圳研究生院生命与健康学部 生物医药研究中心和基因与 抗体治疗重点实验室，深圳 518055） 摘 要 ： 构建Ezrin 原核重组表达载体pET-28a （+ ）-ezrin ，将其转化至大肠杆菌BL2 1 （DE3 ）中，诱导获得Ezrin 蛋白， 将经镍柱亲和层析纯化后的蛋白分别免疫新西兰大耳兔和昆明小鼠 （KM ），获得抗血清，采用ELISA 和Western blotting ，免疫荧 光测定其效价和特异性。ELISA 对抗血清进行效价测定表明抗血清可与抗原发生特异性免疫反应 ；通过Western blotting 对抗血清 进行鉴定表明抗血清可以识别几种细胞株内的特异性条带，其相对分子量为82 kD ，与预测分子量相符 ；免疫荧光试验表明抗血清 可以识别细胞内的Ezrin 蛋白，且定位情况与文献报道相符。最后通过protein G 对抗血清进行了纯化。结果表明用该方法制备的 Ezrin 多克隆抗体有较高的特异性和灵敏度。 关键词 ： 原核表达纯化 Ezrin 蛋白 动物免疫 抗血清 抗体鉴定 The Production and Application of Ezrin Polyclonal Antibody Zhang Hongling Wan Jun Yan Fei Zhang Xinsheng Cao Wei Tao Wei Huang Laiqiang （1. ， ， 100084 ； 2. ， School of Life Sciences Tsinghua University Beijing The Shenzhen Key Lab of Gene and Antibody Therapy Center for Biotech ， ， ， 518055 ） BioMedicine and Division of Life Health Sciences Graduate School at Shenzhen Tsinghua University Shenzhen Abstract:  Constructed Ezrin prokaryotic expression vector pET-28a （+ ）-ezrin, the recombinant plasmid was transformed into E. coli BL2 1 （DE3 ）, induced Ezrin protein was purified through Ni-chelating affinity chromatography and purified protein was used to immunize New Zealand rabbits and Kunming mice, antiserum was removed. The titer and specificity of anti-sera were determined by ELISA, Western blotting and immunofluorescence. The specificity of the anti-Ezrin