金荞麦无色花色素还原酶基因fdlar的克隆和表达分析.pdfVIP

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2016-05-14 发布于安徽
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金荞麦无色花色素还原酶基因fdlar的克隆和表达分析.pdf

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药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2012, 47 (7): 953−961 ·953 · 金荞麦无色花色素还原酶基因 FdLAR 的克隆和表达分析 * 马婧, 王斌, 代银, 眭顺照, 李名扬 (西南大学园艺园林学院, 南方山地学教育部重点实验室, 重庆市花卉工程技术研究中心, 重庆 400716) 摘要: 无色花色素还原酶 (leucoanthocyantin reducase, LAR) 基因是植物类黄酮代谢途径中催化缩合单宁合成的一个关键结构基因, 本研究通过简并 PCR 结合 RACE 的方法, 获得了 1 个金荞麦 (Fagopyrum dibotrys (D.Don) Hara) 无色花色素还原酶基因 FdLAR (GenBank accession: JN793953), 序列全长 1 581 bp, 其中开放阅读框长 1 176 bp, 编码 391 个氨基酸的蛋白质, 在 N 端存在 1 个保守结构域, 属于 RED 蛋白家族。将该基因重组到表达载体 pET-32a (+) 中进行原核表达, 经 IPTG 诱导、SDS检测, 结果表明金荞麦无色花色素还原酶基因能在大肠杆菌BL21 (DE3) 中表达, 电泳检测到1 条大约 66 kD 的外源蛋白, 与预测的融合蛋白分子量相符。利用实时荧光定量 PCR 技术检测FdLAR 基因在金荞麦根茎中不同生长发育时期的表达情况, 同时测定相应根茎中类黄酮的含量, 结果表明 FdLAR 基因的表达量与类黄酮积累之间的关系在营养生长和生殖生长阶段呈现出不同的变化趋势, 推测该基因可能在金荞麦类黄酮次生代谢产物积累中起作用。关键词: 金荞麦; 无色花色素还原酶; 类黄酮; 简并 PCR; 原核表达; 实时荧光定量 PCR 中图分类号: R931 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (2012) 07-0953-09 Cloning and expression analysis of leucoanthocyanidin reductase gene in Fagopyrum dibotrys * MA Jing, WANG Bin, DAI Yin, SUI Shun-zhao, LI Ming-yang (College of Horticulture and Landscape, Southwest University, Key Laboratory of Horticulture Science for Southern Mountainous Regions of Ministry of Education, Chongqing Engineering Research Centerfor Floricul