第六章分光光度技术详解.ppt

分光度法： 可以先测出不同浓度的标准液的吸光度，绘制标准曲线，在选定的浓度范围内标准曲线应该是一条直线. 然后测定出未知液的吸光度，即可从标准曲线上查到其相对应的浓度。 含量测定时所用波长通常要选择被测物质的最大吸收波长，这样做有两个好处： ①灵敏度大，物质在含量上的稍许变化将引起较大的吸光度差异； ②可以避免其他物质的干扰。 ? 二、用紫外光谱鉴定化合物 使用分光光度计可以绘制吸收光谱曲线。 方法是用各种波长不同的单色光分别通过某一浓度的溶液，测定此溶液对每一种单色光的吸光度 以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制吸光度—波长曲线，此曲线即吸收光谱曲线。 各种物质有它自己一定的吸收光谱曲线，因此用吸收光谱曲线图可以进行物质种类的鉴定 当一种未知物质的吸收光谱曲线和某一已知物质的吸收光谱曲线形状一样时，则很可能它们是同一物质。 一定物质在不同浓度时，其吸收光谱曲线中峰值的大小不同，但形状相似，即吸收高峰和低谷的波长是一定不变的。 紫外光吸收是由不饱和的结构造成的，含有双键的化合物能表现出吸收峰。 紫外光吸收光谱比较简单，同一种物质的紫外光吸收光谱应完全一致，但具有相同吸收光谱的化合物其结构不一定相同。 除了特殊情况外，单独依靠紫外光吸收光谱不能决定一个未知物的结构，必须与其他方法配合。 紫外光吸收光谱分析主要用于已知物质的定量分析和纯度分析。 第四节 分光光度法的误差 在分光光度法中，即使将各种因素都控制好，对于浓度过大或过小的样品，误差仍然很大。 浓度过大的样品，其吸光度过高，影响检测器的灵敏度，且读数标尺刻度的精度差，误差亦大，故难于准确。 浓度过低的样品，其吸光度小，则因与仪器本身因素有关，也容易引起检测器标尺上的读数误差。例如光源波动的影响：当光源强度改变1％、吸光度为1.0时，只有0.4％的误差，但在吸光度为O.045时，则可产生9.6％的误差。 实际上，在整个透光度(或吸光度)范围的不同部分均有不同的误差。 从理论上推算，相对误差的最小的部分在透光度为36.8％处(或吸光度为O.4343处) 故通常认为测定值在吸光度0.20～0.80范围内(透光度为20％～65％)误差较小，超出此范围，相对误差均会增大。 【注意事项】 1.仪器须安放在稳固的工作台上，不能随意搬动。严防震动，潮湿和强光直射。 2.盛装比色液时，约达比色皿2/3体积，不宜过多或过少。若不慎使溶液流至比色皿外面须用棉花或拭镜纸擦干，才能放入比色架。拉比色杆时要轻，以防溶液溅出，腐蚀机械。 3.千万不可用手或滤纸等物摩擦比色皿的透光面。 4.比色皿用后应立即用自来水冲洗干净，若不能洗净，用5%中性皂溶液或洗衣粉溶液浸泡，也可用新鲜配制的重铬酸钾洗液短时间浸泡，然后用水冲洗干净，倒置晾干。 5.每套分光光度计上的比色皿和比色皿架不得随意更换。 6.试管或试剂不得放置于仪器上，以防试剂溅出腐蚀机壳。 7.如果试剂溅在仪器上，应立即用棉花或纱布擦干。 8.测定溶液浓度的光密度值宜在0.1—0.7之间最符合光吸收定律，线性好，读数误差较小。如光密度超过0.1—1.0范围，可调节比色液浓度，适当稀释或加浓，再进行比色。 9.合上检测室盖连续工作的时间不宜过长，以防光电管疲乏。每次读完比色架内的一组读数后，立即打开检测室盖。 10.仪器连续使用不应超过2小时，必要时间歇半小时再用。 11.测定未知液时，先作该溶液的吸收光谱曲线，再选择最大吸收峰的波长作为测定波长。 12.721分光光度计的放大器暗盒及单色器箱处放有两个硅胶筒，检测室内放硅胶袋，应经常检查，发现硅胶变色，应更换新硅胶或烘干再用。 13.仪器较长时间不使用，应定期通电、预热。 14.仪器用完之后，须拔去电源，套上仪器罩。 紫外-可见分光光度计常见故障及排除方法 分光光度计常见故障包括光路、电路故障。 根据故障不同应采取不同的排除措施。 接通电源后，指示灯不亮，仪器不工作，可能是电路故障； 读数表不能调零（即0％T）和不能置100％T则可能是光路故障或微电流放大器损坏。 * * * * 分光光度计是由光、机、电等几部分组成的精密仪器，为保证仪器测定的数据正确可靠，不仅应注意正确安装调试，按操作规程使用、保养等，还应了解并能排除仪器的常见故障。 第三章 分光光度技术 分光光度法是利用物质所特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的技术。 第一节 光学原理 把电磁波按频率大小，从频率最小的无线电波到频率最大的γ射线排列，既为电磁波的波谱 电磁波谱 当光线通过某种物质的溶液时，透过光的强度会减弱。因为它分成了三部分： 一部分光在溶液的表面反射或分散，一部分被组成此溶液的物质所吸收，其余便是透过光的强度。即： 入射光=反射光+分散光+吸收光+透过光 “空白”校正：