土壤中分解尿素细菌2013.pptVIP

选修一 * 常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。 一、分离分解尿素的细菌 培养基配方一 15.0g 琼脂 2.0g NaNO3 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4.7H2O 1.4g NaH2PO4 3.0g KH2PO4 培养基配方二 15.0g 琼脂 3.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4.7H2O 2.0g NaNO3 3.0g KH2PO4 培养基配方三 MgSO4.7H2O NaH2PO4 KH2PO4 0.2g 2.1g 1.4g 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 ①从物理性质看此培养基属于哪类？ 固体培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 培养基配方三 MgSO4.7H2O NaH2PO4 KH2PO4 0.2g 2.1g 1.4g 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 用选择培养基可将分解尿素的细菌从土壤中分离出来，怎样才能说明选择培养基确实起到了选择的作用？ 讨论 设置对照 稀释涂布平板法 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。也就是说平板上一个菌落代表一个活菌。 （也叫活菌计数法） 二、分解尿素的细菌的计数 原理： 二、分解尿素的细菌的计数 稀释涂布平板法 104、 105、 106、107 分离土壤中尿素细菌 102、 103、104 分离土壤中真菌 103、 104、105 分离土壤中放线菌 104、 105、106 分离土壤中细菌 目标 土壤稀释倍数 微生物种类 平板上的菌落数应为30～300个，便于准确计数。 1g土样 9ml无菌水 1 3 2 4 5 6 二、分解尿素的细菌的计数 土壤稀释 1g土样 9ml 无菌水 涂布接种 二、分解尿素的细菌的计数 第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计菌落数目为230。 第二位同学在该浓度下涂布了三个平板，统计菌落数分别为：21、212、256。该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要如何改进？ 两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品细菌数，在对应稀释倍数为106倍的培养基中，得到以下两种统计结果： 二、分解尿素的细菌的计数 统计记录 第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。 第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。 二、分解尿素的细菌的计数 在设计实验时，一定要至少涂布三个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。 二、分解尿素的细菌的计数 二、分解尿素的细菌的计数 有一位同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为268，那么每毫升样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.2毫升）多少？ 每毫升样品中的菌落数＝(C/V) × M C:代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V:代表涂布平板时所用的稀释液的体积 M：稀释的倍数 三、操作步骤 1、土壤取样 2、样品稀释 3、取样涂布 4、培养与观察 ①过程： 三、操作步骤 细菌适宜在酸度接近中性的潮湿土壤中生长。 ②铲去土壤表层目的 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 1、土壤取样 2、样品稀释 三、操作步骤 通常选用一定稀释范围的样品进行培养，以保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板。 3、取样涂布： 按照由104～106稀释度的顺序分别吸取0.1 mL进行平板涂布操作，每3个一组并分别标号。按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。 三、操作步骤 4、微生物的培养与观察： 细菌：30～370C的温度下培养1～2d 放线菌：25～280C的温度下培养5～7d 霉菌：25～280C的温度下培养3～4d 我们可以每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目 ①培养温度及时间 ②观察过程 三、操作步骤 *