体外诱导胚兔视网膜神经干细胞脑神经干细胞向视网膜神经上皮细胞分化的研究.pdf

PDR diabetic proliferative 增殖性糖尿病 retinitiS 视网膜病 PVR pr01iferative 增殖性玻璃体 vitreoretinopathy视网膜病 皤啦 acidic glialfibrillaryprotein胶质纤维酸性蛋白 NsE enolase neuron—specific 神经烯醇化酶 NFP neurofilament protein 神经纤维蛋白 MAP2 microtubule—associated protein2微管相关蛋白一2 PKC kinaseC protein 蛋白激酶C GC galactocerebroside半乳糖脑苷脂 Shh sonic hedgehog 音猥(蛋白) bHLH basic helix‘—loop——helix碱性螺旋一环一螺旋 TGF factor transforminggrowth 转化生长因子 IGF insulin一1ike factor growth 胰岛素样生长因子 PLA acid polylactic 聚乳酸 PGA icacid polyglycol 聚羟基乙酸 PLGA acid) poly(1actic—co-glycolic聚乳酸聚羟基乙酸 4 摘要 Stem 第一部分：胚兔视网膜及脑神经干细胞(Neural 分离、培养和鉴定 目的：分离、培养和鉴定胚兔视网膜及脑NSCs细胞，并对不同培养条件 进行比较。 方法：取孕24天胚兔视网膜及大脑皮质制备单细胞悬液，分别在5种不同 培养基中进行体外培养，通过连续传代使细胞纯化。采用免疫荧光法及 流式细胞仪检测不同培养条件下获得的细胞对神经干细胞和视网膜神经 上皮细胞抗原的表达。 纯化效果。传三代后nestin(+)细胞较原代细胞明显增高，说明悬浮培养 皮质NSCs。免疫荧光法显示无血清培养条件下的两种组织来源的NSCs都 部分表达nestin。 第二部分：胚兔视网膜及脑神经干细胞NSCs的体外诱导分化 目的：体外诱导NSCs向视网膜神经上皮细胞分化，并对不同诱导条件进 行比较。 方法：选取无血清条件下传三代的NSCs，撤去生长因子，分别在含5％FBS 胞生长接近汇合时终止培养。通过免疫荧光、流式细胞术鉴定被诱导的 细胞对神经干细胞和视网膜神经上皮细胞抗原的表达。 结果：诱导后NSCs生长速度加快，细胞主要分化为类神经胶质细胞及神 经元细胞。视网膜NSCs经诱导后大部分突触较短，可见类神经节细胞； 大脑皮质NSCs经诱导后大部分突触较长，