嵌合抗CD20基因工程抗体的构建表达和其功能研究.pdfVIP

中文摘要 本研究采用噬苗体袭丽显示技术克隆抗CD20抗体轻、重链可变区基因，构 建联会撬CD20获钵及葵Fab’片段，在噙巍动耪缎躯寒大肠轷嫠中遴嚣表达；并 对Fab’抗体片段豹体内辨挠瘤活往进亏亍磷究，暖期将抗CD20抗体H147雄向B辩 巴细胞瘤临床治疗应用。 一i～辍薅链可变区基爨党隧及单链抗体库孵榴建 鬻毅鬟取H147杂交瘸维藏慈RNA，番』蔫RT-PCR法扩瑾抗髂辍霪链霹变区基 因片段，经Overlap PCR，利用连接链(G,s)，基因片段将抗体辍熏链基因连接 5E载体上，构建抗CD20 构成鹅链抗体(ScFv)錾网，将ScFv基因重组到pCANTAB 鲍蘩阂序到进行痔列溅定分析，结果显示竞撩6的基因序列完捋赍PDB文库中豹 抗体撼本框架序列，是抗体基因序列。 二嵌食抗体的掏建表达及活佳鉴定 聪瘸PCR获表这载傣pCANTAB 区基因，将vH、vL基因毙隆到表达载体pYZF中，构建抗CD20抗体表达载体 a pYZFcd20，并在大肠杆菌中进行高效可溶性分泌表达Fab’，表达墩可达3mg／ml 本研究对嵌合抗CD20Fab’片段的体内外活性进行了进一步的研究，竞争 Fab’不抑制Daudi细胞、 69pg／ml、26p49／ml。3H掺入试验显示，嵌合抗CD20 浚尾静脉给药，稍用嵌食抗CD20Fab嚎遮产裙遴行Raji维腱裰鬣移潼瘸实验 治疗，结果显示，嵌合抗CD20Fab’具有很好的抑瘤作用，其抑瘤机制可能是 Fab’诱导Daudi 通过诱导Raji细胞调亡来进行；利用FACS测定嵌合抗CD20 Fab’可诱导 缨瑰、Raji细腿澜亡鲍溪性结累疆示，5099／ml浓度嵌台抗CD20 Daudi细胞、Raji细胞调亡。 奉磷究穗抗CD20抗体￥}{、￥L基嚣分裂克爨爨pDR2、pDRl羧毒搴中，季毒建 嵌合抗CD20轻熏链表达溅体pDRL、pDRH，利用这两个载体共转染COS一7细胞， 具有IgOl的表达。 总之，本研究成功克隧到抗CD20抗体轻重镳可变医戆因，称建嵌合抗CD20 抗体I西l及其Fab’片段，并分别制用大脑杆菌和哺乳动物细胞COS一7表达Fab7 瑰中少量孵蠲表这；髂内终实验袭明袋会抗CD20Fab’片段具有较高豹摭B游 、 融细胞瘸活性，其肿瘤生长抑制率为56％斗、～ 荚链词：淋巴瘤噬菌体显示单克隆抗体嵌台Fab’CD20 Abstract clinic ofBce]l TomakemonoclonalH147enterthe therapy antibody cloned ofvariableofH147were display lymphoma，genesregion byphage ofH147and HAMA