第七章线粒体和叶绿体复习题.docVIP

线粒体和叶绿体 学习要求：掌握线粒体的分离与鉴定、结构与功能的知识。掌握氧化磷酸化的过程原理和区别，掌握线粒体和叶绿体蛋白质合成及其转运知识点。理解线粒体与叶绿体的半自主性及其增殖与起源的相关知识。了解叶绿体的结构和功能。 本章的难点与重点：氧化磷酸化的机制；线粒体和叶绿体蛋白的运送与装配。 基本概念： 呼吸链：也称电子传递链，是位于线粒体内膜上的有一系列电子传递提案一定顺序排列起来形成的呼吸电子传递轨道。电子传递体是一些氧化还原迅速而可逆的分子，其在电子传递链中是按氧化还原电位由低到高的顺序依次排列的。呼吸底物氧化分解过程脱出的电子经呼吸电子传递链最终传递给分子氧，将氧还原成水。 氧化磷酸化：呼吸链上氧化作用释放出的能量与ADP的磷酸化作用偶联起来形成ATP的过程称为氧化磷酸化。因此氧化磷酸化特指呼吸链上磷酸化作用，有别于底物水平的磷酸化和光合磷酸化。 ATP合成酶：又称为F1F0-ATP酶，广泛存在于线粒体、叶绿体、异养菌和光合细菌中，是生物体能量转换的核心酶。该酶分别位于线粒体内膜、类囊体膜或质膜上，是跨膜的通道蛋白，参与氧化磷酸化和光合磷酸化，在跨膜质子动力势的推动下，或者说在他的引导下，质子通过膜来驱动从ADP和无机磷合成ATP。 化学渗透假说：是1961年由Mitchell等提出的，用来解释氧化磷酸化耦连机理学说。该假说的主要内容是：呼吸链的各组分在线粒体内膜中的分布式不对称的，当高能电子在膜中沿呼吸链传递时，所释放的能量能将H+从膜基质侧泵至膜间隙，由于膜对质子是不通透的，从而使膜间隙的H+浓度高于基质，因而在内膜的两侧形成电化学质子梯度。在这个梯度驱动下，H+穿过内膜上的ATP合成酶流回到基质中，其能量促使ADP和Pi合成ATP,从而使体内能源物质氧化释放的化学能通过转变成渗透后，再转移到ATP中的过程。 半自主性细胞器：指线粒体和叶绿体两种细胞器具有自我增殖所需要的基本组分，具有独立进行转录和翻译的功能；但两种细胞器基因组信息量是有限的，绝大多数蛋白质是由核基因组编码，在细胞质核糖体上合成后转运至之，即两种细胞器的自主性是有限的，基因在转录和翻译过程中在很大程度上要依赖于核质遗传系统，故称为半自主性细胞器。 基质：内膜和嵴包围着的线粒体内部空间，含有多种蛋白质和脂类，催化三羧酸循环中脂肪酸和丙酮酸氧化的酶类，也都存在于基质中。此外还含有线粒体DNA、线粒体核糖体、tRNA、rRNA以及线粒体基因表达的各种酶，基质的标志酶是苹果酸脱氢酶。 线粒体： 存在于细胞质内的一个重要细胞器，由内外两层单位膜为成的膜相结构。内膜箱内凸起形成嵴，嵴上的颗粒为基粒，是氧化磷酸化的关键装置。线粒体基质是进行三羧酸循环的场所。线粒体是细胞内能量转换系统，其主要功能是产生ATP，提供细胞生命活动所需要的能量。 问答题： 线粒体各部分如何分离？ 线粒体使细胞内一种非常微小的细胞器，要对其各部分进行化学分析，首先必须将其各部分分离开来。完整的线粒体通过差速离心便能分离出来，而各种亚线粒体成分则需要利用密度梯度离心来进行分离。每100g克的组织大约可获得1克线粒体。 分离外膜一般有两种方法，一种通过低渗处理，让线粒体吸水膨胀，直到把外膜张破，然后使剩下内膜和基质收缩；另一种是使用两种去污剂----毛地黄苷和lubrol.毛地黄苷可使完整的内膜与外膜分开，外膜很轻，要用强离心力和低的密度梯度才能分离出。外膜与内膜分开后，便可以对其酶系统进行定位和定性研究，去掉外膜后的线粒体部分仍能进行氧化磷酸化活动，说明氧化磷酸化酶系存在于线粒体内膜上。去污剂Lubrol又可以进一步使线粒体内膜与基质分离。 如何测定线粒体呼吸链各组分在内膜上的排列分布？ （1）测定各电子传递体的标准氧化还原电位,因为各组分在呼吸链上的排列顺序与其得失电子的趋势有关，电子总是从低氧化还原电位向高氧化还原电位流动，氧化还原电位值愈低的组分失去电子的倾向越大，愈易成为还原剂而处于传递链的前面。 （2）用分离的电子传递体进行体外重组试验。NADH可使NADH 脱氢酶还原，但不能直接使细胞色素b、c、aa3还原。同样，还原型的NADH脱氢酶也不能直接与细胞色素c起作用，必须经过CoQ和细胞色素b和细胞色素c1后才能在与细胞色素c起作用。 （3）利用呼吸链的特殊阻断抑制剂，阻断链中某些特定的电子传递环节。若加入某种抑制剂后，则在阻断环节的负电性侧的电子传递体因不能被氧化而大多处于还原状态；但阻断环节的正电侧，电子传递体因不能被还原而大多处于氧化状态，从此可以推断出各成分间的关系。 （4）最直接的证据是用分光光度计法通过吸收光谱的变化来测定完整线粒体中呼吸链的各个电子传递体的氧化还原状态。当某个电子传递处于还原状态时，以氧化态作对照，就可以用灵敏的分光光度计测出呼吸光谱的变化。测定结