02蛋白质化学.ppt

基本氨基酸的分类 (3) 与2,4-二硝基氟苯（DNFB）反应 应用：鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸 A.首先由Sanger应用， 又称Sanger反应,确定了胰岛素的一级结构 B.肽分子与DNFB反应，得DNP-肽 C.水解DNP-肽，得DNP-N端氨基酸及其他游离氨基酸 D.分离DNP-氨基酸,层析法定性DNP-氨基酸，得出N端氨基酸的种类、数目. (4) Dansyl-Cl反应 用DNS(二甲基萘磺酰氯)测定N端氨基酸 原理DNFB法相同 但水解后的DNS-氨基酸不需分离，可直接用电泳或层析法鉴定 由于DNS有强烈荧光，灵敏度比DNFB法高100倍，比Edman法高几到十几倍 可用于微量氨基酸的定量 (5)与异硫氰酸苯酯（PITC）的反应 由Edman于1950年首先提出,又称Edman降解法 为α- NH2的反应 Edman （苯异硫氰酸酯法）氨基酸顺序分析法实际上也是一种N-端分析法。此法的特点是能够不断重复循环，将肽链N-端氨基酸残基逐一进行标记和解离。 一个氨基酸的氨基与另一个氨基酸的羧基之间失水形成的酰胺键称为肽键，所形成的化合物称为肽。 由两个氨基酸组成的肽称为二肽，由多个氨基酸组成的肽则称为多肽。组成多肽的氨基酸单元称为氨基酸残基。 在多肽链中，氨基酸残基按一定的顺序排列，这种排列顺序称为氨基酸顺序 通常在多肽链的一端含有一个游离的?-氨基，称为氨基端或N-端；在另一端含有一个游离的?-羧基，称为羧基端或C-端。 （二）肽单元 　氮原子上的孤对电子与羰基具有明显的共轭作用，肽键中的C-N键具有部分双键性质，不能自由旋转。所以连接在肽键两端的基团处于一个平面上，这个平面称为肽平面。在大多数情况下，相邻肽平面以反式结构存在。 蛋白质的一级结构(Primary structure)包括： (1)组成蛋白质的多肽链数目; (2)多肽链的氨基酸顺序; (3)多肽链内或链间二硫键的数目和位置。 ★其中最重要的是多肽链的氨基酸顺序，它是蛋白质生物功能的基础。 蛋白质的空间结构 蛋白质分子的多肽链按一定方式折叠、盘绕或组装成特有的空间结构，亦称高级结构。蛋白质的高级结构即蛋白质的构象。 构型是指不对称碳原子上相连的各原子或取代基团的空间排布。任何一个不对称碳原子的4个原子或基团只可能有两种不同的空间排布，即两种构型：D-构型或L-构型。构型的改变必定要有共价键的断裂和重组。 构象是指一个由几个碳原子组成的分子，由于单键的旋转造成的不同碳原子上各个原子或取代基团的空间排布。构象的改变不需要共价键的断裂和重组，只需要单键旋转方向和角度改变即可。 酰胺平面与α-碳原子的二面角（ φ和ψ ） 维持蛋白质分子构象的作用力 （三）?-折叠 是蛋白质的一种二级结构：肽链伸展，且按层排列；相邻肽链的长轴相互平行，链间氢键与长轴接近垂直，靠相邻肽链间氢键维持结构稳定性；?-折叠结构的氢键主要是由两条肽链之间形成的；也可以在同一肽链的不同部分之间形成。 ?-折叠有两种类型。一种为平行式，即所有肽链的N-端都在同一边。另一种为反平行式，即相邻两条肽链的方向相反。 蛋白质的β -转角 loop区： ?螺旋和β回折组合构成的。这些? -螺旋和β-回折由不同长度和不规则形状的的环区域相连接。 （九）蛋白质的超二级结构 （1）超二级结构的概念 指蛋白质中相邻的二级结构单位(即单个?-螺旋或?-转角)组合在一起，形成有规则的在空间上能辩认的二级结构组合体。 ★超二级结构在结构层次上高于二级结构，但没有聚集成具有功能的结构域。 超二级结构类型 蛋白质的结构域 二级结构卷曲折叠成的相对独立、近似球形的组装体。 三级结构的基本单位是结构域。一个结构域指的是一条多肽链或能够独立折叠为稳定的三级结构的多肽链的一部分。结构域也是一个功能单位，通常蛋白质中不同的结构域是和不同的功能相关的。 一个蛋白质可以只包含一个结构域或者是由几个结构域组成。 脂肪酸的合成需要七种不同的催化反应，在植物的叶绿体中，这些反应由七种不同的酶所催化，而在哺乳动物中，这些反应则由一条多肽链的七个结构域来完成。 C.一级结构改变可导致分子病 别构现象 含2个以上亚单位的蛋白质分子,如果其中的一个 亚单位与小分子物质结合,那就不但该亚单位的空间结构要发生变化,其它亚单位的构象也将发生变化,结果整个蛋白质分子的构象乃至活性均将发生变化.这一现象称为变构或别构作用(allosteric effect)。它蛋白质在生命活动过程中的功能变化极为重要。 1. 超离心法 原理:将蛋白质溶液放在25-50万倍重力场的离心力作用下,使蛋白质颗粒从溶液中沉降下来. 可应用光学方法测定界面移动的速