5型磷酸二酯酶抑制剂逆转MRP7介导多药耐药机理的研究.doc

分类号：___________  密级: __________ UDC: ___________  5 型磷酸二酯酶抑制剂逆转 MRP7 介导多药 耐药的机理研究  姓 学 院 专  名： 号： 系： 业：  陈俊江 2110943021 公共卫生学院 流行病与卫生统计学  研究方向： 导师姓名：  分子流行病学 陈思东（教授）  陈哲生（教授） 论文提交日期：__2012 年 05 月 13 日 论文答辩日期：__2012 年 05 月 22 日 学位授予单位：_ 广东药学院 二○一二 年 五 月 广东药学院学位论文原创性声明 本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，系我个人在导师的指导下进 行研究工作所取得的成果。除文中已特别加以标注和致谢的地方外，不包 含其它个人或机构已经发表或撰写过的研究成果。对本研究做出贡献的其 它个人和集体，均已在文中明确说明和致谢。本人充分意识到本声明的法 律结果完全由本人承担。 学位论文作者签名：＿＿＿＿＿  日 期：  年  月  日  学位论文使用授权的声明 本人完全了解广东药学院有关保留和使用学位论文的规定，学校有权 保留和向有关部门或机构送交本论文的复印件和电子版，允许论文被查阅 和借阅。学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库，可以 采用影印、缩印或其它复印手段保存和汇编本学位论文。 保密论文在解密后适用本声明。  论文作者签名：＿＿＿＿＿  论文导师签名：＿＿＿＿＿  日 期：  年  月  日 目录 中文摘要……………………………………………………………………………....4 英文摘要………………………………………………………………………………7 英文缩略词表……………………………………………………………………..…11 1. 前言…………………………………………………..…………………………..13 1.1 肿瘤多药耐药……………………..………………………………………...13 1.2 ABC 跨膜转运蛋白超家族………………..……………………………..….13 1.3 跨膜结构域（TBDs）和核苷酸结合域（NBDs）…………………..……14 1.4 P-糖蛋白（ABCB1/P-gp）……………………………………………..…....16 1.5 多药耐药相关蛋白（ABCCs/MRPs）………………………………..……16 1.6 乳腺癌耐药性蛋白（ABCG2/BCRP）……………………………….…….18 1.7 克服肿瘤多药耐药………………………………………………………….18 2. 材料与方法……………………………………………………..…………...……19 2.1 试剂…………………………………………………………....……….……19 2.2 仪器……………………………………………………..……………….…..20 2.3 细胞株和细胞培养……………………………………………………..…...20 2.4 MTT 法检测细胞毒性实验………………………………………..………...20 2.5 [3H]-紫杉醇药物积累实验………………………………………..…………21 2.6 [3H]-紫杉醇药物积累实验………………………………………..…………21 2.7 Western Blot 检测蛋白的表达………………………………………..…….22 2.7.1 细胞总蛋白提取………………………………………..……………..22 2.7.2 样品蛋白定量………………………………………..………………..22 2.7.3 Western Blot………………………………………..…………………. 22 2.8 荧光显微镜观察 MRP7 在细胞中的定位……………………………….…23 2.9 统计分析……………………………..…………..………………………….24 3. 结果……………………………..…………..…………………………………….24 3.1 Sildenafil，vardenafil 和 tadalafil 的细胞毒性实验………………………..24 3.2 Sildenafil 和 vardenafil 有效逆转 MRP7 介导的紫杉醇耐药………………25 3.3 Sildenafil 和 vardenafil 有效逆转 MRP7 介导的多西他赛耐药……………26 2 3.4 Sildenafil 和 vardenafil 有效逆转 MRP7 介导的长春碱耐药………………27 3.5 Sildenafil，vardenafil 和 tadalafil 不改变顺铂在 HEK293-MRP7 中的药物敏 感性……………