高效液相色谱法的简介.pptVIP

1.1 HPLC与经典LC区别 1．经典LC：仅做为一种分离手段 柱内径1~3cm，固定相粒径100μm 且不均匀 常压输送流动相 柱效低 分析周期长 无法在线检测 2．HPLC：分离和分析 柱内径2~6mm，固定相粒径10μm（球形，匀浆装柱） 高压输送流动相 柱效高 分析时间大大缩短 可以在线检测 1.2 HPLC与GC差别 1．分析对象 GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品， 高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及 高聚物的样品不可检测 ,占有机物的20%. HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性 和热稳定性的限制,分子量大、难气化、热稳 定性差及高分子和离子型样品均可检测.用途广范， 占有机物的80%。 2.流动相差别GC：流动相为惰性气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用HPLC：流动相为液体流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素，对分离起很大作用,流动相种类较多，选择余地广,流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用,选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 ,可以增大分离选择性. 3．操作条件差别 GC：加温操作 HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小） 三.各类高效液相色谱法 液-固吸附色谱 液-液分配色谱 离子交换色谱 离子色谱 排阻色谱 亲和色谱 2. 固定相按孔隙深度分类，可分为表面多孔型和全多孔型固定相两类 表面多孔型固定相： 全多孔型固定相： 它由直径为10nm的硅胶微粒凝聚而成。也可由氧化铝微粒凝聚成全多孔型固定相。 特点：颗粒很细（3～10μm），孔仍然较浅，传质速率快，最大允许进样量比表面多空型固定相大，易实现高效、高速。特别适合复杂混合物分离及痕量分析 (3) 化学稳定性好。不能选与样品发生反应或聚合的溶剂。也要避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失。 (4) 溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好的选择性。 (5) 溶剂要与检测器匹配。 对于紫外吸收检测器，流动相不应有紫外吸收。 对于折光率检测器，要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相，以达最高灵敏度。 3.1 液-固吸附色谱法 固定相为固体吸附剂,流动相为液体。 固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常 使用的是5～10μm的硅胶吸附剂； 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂 分离机制：利用溶质分子占据固定相表面吸附活性中心能力的差异，即物质吸附作用的不同来分离的。 适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性 3.2 液-液分配色谱 固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相色谱），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相色谱）。正相与反相的出峰顺序相反； 固定相：早期涂渍固定液，固定液流失较多，较少采用； 化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。 正相高效液相色谱 正相高效液相色谱是指以亲水性的填料作固定相(如在硅胶上键合羟基、氨基或氰基的极性固定相)，以疏水性溶剂或混合物作流动相(如己烷)的液相色谱。在液相色谱发展的早期，类似于气相色谱把含羟基、氨基或氰基的极性固定相涂渍在硅胶上这样容易被流动相冲洗掉，现在几乎都使用键合固定相了。 反相高效液相色谱 反相高效液相色谱是指以强疏水性的填料作固定相、以可以和水混溶的有机溶剂做流动相的液相色谱。如在硅胶上键合C18或C8烷基的非极性固定相，以极性强的水、甲醇、乙腈作流动相的高效液相色谱。 正、反相色谱中极性和保留时间的关系 3.3 离子交换色谱 固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂； 流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液； 基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长； 阳离子交换：R—SO3H +M+ = R—SO3 M + H + 阴离子交换：R—NR4OH +