第十章发酵液的预处理和液-固分离.pptVIP

抗生素生物合成（微生物发酵)生产下游过程主要包括: 发酵液的预处理和液-固分离 提取过程 精制过程 发酵液的预处理和液-固分离 发酵液的成分:抗生素(0.1-0.5%，10-30kg/m3) 、大量菌体、菌种代谢物、未利用培养基 预处理是抗生素分离纯化的第一道工序 预处理的目的： 在抗生素提取精制之前,除去干扰物质 经预处理，增加抗生素的水溶性（pH值） 一 确定预处理方法的基本条件 1、了解抗生素存在的部位 发酵液：大部分抗生素分泌到胞外，经过液-固分离，得澄清发酵液，进一步纯化，得到纯品 菌体内：一些抗生素如多烯类的制霉菌素、两性霉素、曲古霉素累积于菌丝体中，且水溶性很小，取其滤饼，再用其他溶剂萃取 2、稳定性 决定发酵液预处理的pH、温度及化学试剂的选择 如青霉素稳定性差，酸化pH只能控在4.8-5.2,并要求低温。（易分解而失活） 多黏菌素E稳定性好，可在pH2.0、95℃处理 红霉素酸性不稳定（酸水解产生脱水红霉素，脱水红霉素进一步水解成红霉糖胺和红霉糖。）,碱性中较稳定,故发酵液只能加NaOH调pH7.9-8.0,过滤去除蛋白质 3、提取工艺对滤液质量的要求 一般要求：滤液澄清、pH适中、有一定浓度 不同的提取工艺路线，对滤液质量要求不同： 如离子交换法：对无机离子（特别是高价离子）要求较严 溶媒萃取法：要求蛋白含量低，减轻乳化现象 直接沉淀法：对滤液质量要求更高，加草酸酸化，还要加净化剂，滤液还需复滤，结晶前还需脱色处理 二、 发酵液预处理的方法 发酵液预处理的去除杂质： 去除可溶性黏胶状物质，包括核酸、杂蛋白、不溶性多糖等 去除无机盐，包括Fe3+、Ca2+、Mg2+等 （一）、菌丝体及蛋白质的处理 1、等电点沉淀 蛋白质为两性物质，在等电点时，在水中溶解度最小，能沉淀除去。蛋白质等电点都在酸性范围内，pH4.0-5.5 2、变性沉淀 最常用的方法是加热，适合于对热稳定的抗生素，加热可加速蛋白凝聚，还能使液体黏度降低，加快过滤速度 在链霉素生产中，采取pH3.0情况下，加热70℃，维持30min以凝固蛋白质，过滤速度可提高3倍，黏度降低到原来的1/6 3、加各种沉淀剂沉淀 蛋白质能与一些阴离子如三氯乙酸盐、水杨酸盐、钨酸盐等形成沉淀。在碱性溶液中，能与一些阳离子如Ag+、Cu2+、Zn2+、Fe3+和Pb2+等形成沉淀 4、加入凝聚剂 某些无机盐可使细胞、细胞碎片及蛋白质等胶体颗粒发生凝聚作用而被去除。常用的凝聚剂：Al2（SO4）3· 18H2O、AlCl3 · 6H2O、FeCl3、ZnSO4、MgCO3等。 5、加入絮凝剂 发酵液中加入絮凝剂如壳聚糖、海藻酸钠、明胶等，形成粗大的絮凝团，有助过滤。 6、吸附 利用吸附作用能有效去除杂蛋白。 四环素发酵液中加入黄血盐和硫酸锌，生成亚铁氰化锌钾K2Zn3[Fe（CN）6]2的胶状沉淀，将蛋白与菌体去除 7、酶解法去除不溶性多糖 如淀粉酶将培养基中多余的淀粉水解成单糖，降低发酵液黏度，提高滤速 （二）、高价金属离子（Ca2+、Mg2+、Fe3+）的去除 1、离子交换法： 滤液通过阳离子交换树脂 2、沉淀法： Ca2+： 加入草酸，生成草酸钙（一举两得：沉淀、凝固），但草酸价格较贵，应注意回收 Mg2+：加入三聚磷酸钠Na5P3O10 ，与Mg2+形成络合物，消除Mg2+的影响 Fe3+：加入黄血盐，形成普鲁士蓝沉淀 Fe3+ + K4Fe（CN）6→ Fe4[Fe（CN）6]3↓+ 12K+ 三、 发酵液的液-固分离 1、板框压滤机 目前较常用的过滤设备 优点：过滤面积大，能耐受较高压力差,结构简单，造价较低，动力消耗少 缺点：不能连续操作，设备笨重，劳动强度大，非生产时间长，生产能力低 2、真空鼓式过滤机 能连续操作，实现自动控制 主要适用于菌丝较粗的真菌发酵液的过滤，如青霉素发酵液的过滤 3、离心分离机 优点：速度快，效率高，卫生条件好。占地面积小，能自动化、连续化控制，适合于大规模的分离过程 缺点：设备投资费用高、能耗较高 抗生素的提取 溶媒萃取法 离子交换法 吸附法 沉淀法 溶媒萃取法 用一种溶媒将溶质自另一种溶媒中提取出来 溶媒的要求： 两种溶媒必须不互溶，以能形成两相而便于分离 所选用的溶媒对抗生素应有较大的溶解度和选择性 溶媒的选择 根据类似物容易溶解类似物的原则，应选择与抗生素结构相近的溶媒。 价廉、毒性小、来源广泛易得 在抗生素工业生产中最常用的是乙酸乙酯、乙酸丁酯和丁醇等 一、萃取方式 萃取过程，按其操作方式可分为： 单级萃取 多级萃取： 顺流萃取 逆流萃取 1、单级萃取 料液(F)：在溶媒萃取中，被提取的