第6章+DNA的重组剖析.ppt

第六章 DNA重组 突变和重组是提供进化起始物质的两个过程。 突变引起的遗传改变能引起蛋白质中氨基酸序列的变化，该变化引起表型的改变，通过自然选择发生作用。 重组提供一个基因组结构的变化，也会引起表型的变化，也通过自然选择发挥作用。 DNA重组（recombination）是指发生在DNA分子内或DNA分子之间核苷酸序列的交换、重排和转移现象，是已有遗传物质的重新组合过程。 遗传重组的存在确保了遗传物质代与代之间基因组的重排，从而形成一个物种内部个体之间的遗传差异。 遗传重组不仅仅发生于代与代之间，一个个体的基因组也可以发生重排。重组不只是在减数分裂和体细胞核基因中发生，也在线粒体基因间和叶绿体基因间发生。 DNA重组能迅速增加群体的遗传多样性，通过优化组合积累有利突变，推动生物进化。此外，DNA重组还参与DNA损伤修复，某些基因表达的调控等重要的生物学过程。 根据不同的机制，可将重组分成4类： 同源性重组（homologous recombination） 位点特异性重组（site-specific recombination） 异常重组（illegitimate recombination) 转座重组（transposition recombination） 用人工操作构建DNA重组体，将其导入受体细胞扩增或表达，称为DNA克隆或分子克隆（molecular cloning）。 第一节 同源重组 同源重组（homologous recombination）发生在两个同源DNA片段之间，是在两个DNA分子的同源序列之间直接进行交换的一种重组形式。同源重组主要是利用DNA序列的同源性识别重组对象，由碱基序列提供识别的特异性。 同源性重组最主要特征是相关的酶可以利用任何一对同源序列为底物。 真核生物减数分裂时的染色体之间的交换，某些低等真核生物及细菌的转化、转导、接合，噬菌体的整合等都属于同源性重组这一类型。 在整个基因组中，同源重组的频率并不恒定，并且跟染色体的结构有关。例如在异染色体附近遗传物质的交换要受到抑制。 1. 进行同源重组的基本条件 （1）在交换区具有相同或相似的序列 发生同源性重组的两个区域的核苷酸序列必须是相同或非常相似的。 同源性重组常常只发生在两个DNA分子中的相同部位。 （2）双链DNA分子之间互补碱基进行配对 两个DNA分子的链之间互补的碱基配对确保重组只发生在同样的基因座之间。 在该部位两个双链DNA分子通过链之间互补的碱基配对被维系在一起。 （3）重组酶 参与重组反应的酶，保证重组的顺利进行。 重组过程中，每个分子的链首先断裂，然后进行修复和连接，两个DNA分子之间发生交换。重组完成后，重组分子的解离和释放等过程均是在酶催化下进行的。 （4）异源双链区的形成 同源性重组时，在两个DNA分子之间互补碱基配对的区域称为异源双链区（heteroduplex region）。 两个DNA分子通过一段异源DNA双螺旋共价相互连接。 2. 同源性重组的分子模型 第一个被广泛接受的重组模型是1964年由Robin Holliday提出的Holliday模型。 即将发生重组的两个DNA分子同一个部位的两个单链的断裂，从而引发重组。 两个断裂单链的游离端彼此交换，形成两个异源双链，然后末端连接形成Holliday连接体（Holliday Junction）。 一旦Holliday连接体形成后，它能进行重排从而改变链的彼此关系。这种重排称为异构化，因为在此过程中没有键的割裂。 一旦形成Holliday连接体后，就能被拆分。是否发生重组依赖于拆分时Holliday连接体的构象。 Holliday模型被称为双链侵入模型，因为由于每一个DNA分子的一条链侵入到另一个DNA分子，它解释了在重组时两个DNA分子的异源双链是如何形成的。 Holliday连接体也能通过碱基之间氢键的断裂和再连接而发生左右移动。这个过程称为支链迁移（branch migration)。 （2）单链侵入模型 单链侵入模型是对Holliday模型的修改。 在该模型中，两个DNA分子中的一个单链在随机部位被切断，然后暴露的末端侵入到另一个双链DNA分子，发现它的互补序列以后将替代与它相同的链。然后DNA聚合酶将用留下的那条链作为模板，填充上侵入链所留下的缺口。被替代的链被降解，它的残留末端与另一分子中新合成的DNA链相连接形成Holliday连接体。 Holliday连接体形成以后，就会产生异构化然后拆分。 单链侵入模型中，异源双链首先只在两个DNA分子中的一个形成。Holliday中间体形成以后通过支链迁移能够在另一个DNA分子上产生异源双链，这样就解释了异源双链是