22土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(选修1)解说.ppt

课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 课程标准 测定某种微生物的数量。 课标解读 1.利用选择培养基分离细菌。 2.运用活菌计数法测定土壤中尿素细菌的数量。 1．筛选菌株 (1)自然界中目的菌株筛选的依据是根据它对 的要求，到相应的环境中去寻找。 (2)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时 或 其他微生物生长。 (3)选择培养基：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 和 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。 2．统计菌落数目 (1)常用方法： 法。 (2)统计依据：当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品大约含有多少活菌。 (3)平板选择菌落计数时一般选菌落数在 的平板，计数公式为 。 (2)间接计数法(活菌计数法) ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 ②操作 a．设置重复组：同一稀释度下，至少涂布3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。分析结果时，需考虑重复组的结果是否一致，结果明显不一致，意味着操作有误，需要重新实验。 b．为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。 ③计算公式：每克样品中的菌株数＝C/V×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积/mL，M代表稀释倍数。 注意：一般选择菌落数在30-300的平板进行记数。 3．设置对照 (1)对照实验：是指除了 以外，其他条件都相同的实验。 (2)主要目的：排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验的可信度。例如为了确认培养基是否被杂菌污染，需以 培养基培养作为空白对照。 1．土壤中分解尿素的细菌的分离 (1)分离的原理 ①土壤中的细菌之所以能够分解尿素，是因为它们体内能合成脲酶。这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起催化作用。 ②实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 ③分离分解尿素的细菌的培养基中的氮源只有尿素，理论上只有能合成脲酶的微生物才能在上面生长。 1．实验设计 (1)土壤取样 ①土壤微生物大约70%～90%是 。 ②细菌适宜在酸碱度 的 土壤中生长，绝大多数分布在距地表 的土壤层。 (2)样品处理 样品的 直接影响平板上生长的 ，选用一定稀释范围的样品液进行培养，保证菌落数在 之间，便于计数。 (3)微生物的培养与观察 将培养基平板放置于 温室中培养1～2d，每隔 统计一次 数目，最后选取数目 时的记录作为结果。 (4)细菌的计数 当菌落数目稳定时，取同一条件下的至少 个平板进行计数，求出 ，并根据所对应的 计算出样品中细菌的数目。 2．操作提示 (1)无菌操作 ①取土样的用具在使用前都需要 。 ②应在 旁称取土壤。并在 附近将土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。 ③在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在 旁操作。 (2)做好标记 本实验使用的平板和试管比较多，为避免混淆，最好在使用前就 。 3．课题延伸 细菌合成的 将尿素分解成 ，使培养基的 增强。在以 为唯一氮源的培养基中加入 指示剂培养细菌，若指示剂变 ，可确定该种细菌