3株相隔5到10年H9N2亚型禽流感病毒HA基因差异的分析.docVIP

禽类传染病一禽流感 结合位点的２０２位和２０３位氨基酸为Ｌ、Ｙ，在所有毒株中都是相当保守的。这些位点的生物学意义 有待于进一步探讨。 （４）同源性分析表明６个毒株核苷酸同源性为８２．９％～１００％，氨基酸同源性为８５．６％～９９．８％。 除了２嘴之外，其余５个毒株之间核苷酸与氨基酸的同源性都在９３％以上。与国内代表株 ＤＫ／ＨｒＧ９，９７核苷酸的同源性分别为： ９６．６％、９５．７％、９３．３％、９５．７％、９４．７％、８２．５％；氨基酸同 源性分别为为９６．４％、９５．９％、９４．９％、９５．９％、９５．１％、８８．０％，表明亲源关系比较近。ＨＡ基因系统 进化树表明：３栉、６撑、ｌ嘴、１７＃、１８群毒株属于欧亚分支，与欧亚种系中其它大陆分离株亲源性较近。 而２嘴属于北美分支，表现出与其它毒株较大的差异性，与北美种系的亲源性较近。以上说明中国 分离株与韩国、美国Ｈ９Ｎ２分离株等的进化区别，进而也表明了虽然Ｈ９Ｎ２禽流感病毒在亚洲的许 多国家发生与流行，但其起源和进化各有特点，与地域有一定的相关性。 ３．２禽流感分子流行病学研究表明，流感病毒的ＨＡ基因，主要是ＨＡｌ编码区在持续不断地、 快速地发生突变。ＨＡ基因的变化在嘌呤之间的互换（Ａ．Ｇ）或嘧啶之间的互换（Ｃ．Ｔ）最常见，嘌呤与嘧 啶之间的颠换则少见，插入（ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ）和缺失（ｄｅｌｅｔｉｏｎ）突变仅是偶尔出现。人类Ｈ３Ｎ２株流感病毒的 ＨＡ的头部（ＨＡｌ）有５个抗原结合位点和受体结合位点。在禽流感Ｈ５、Ｈ９株的ＨＡ头部也有相似的 抗原位点。ＨＡ １的变异多发生在５个抗原位点：Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ。抗原位点Ａ位头部，由第１４０一１４６位 氨基酸残基形成的环状结构及邻近的氨基酸残基组成；抗原位点Ｂ位于顶部，其中心由第１５５．１６０ 位氨基酸残基构成。２００３年ＭａｔｒｏｓｏＶｉｃｈ等【８】发现ＨＡ头部的糖基化位点的增加和减少可影响抗原 位点的结构，降低病毒对宿主细胞的亲和力，改变病毒的抗原性或致病性。Ｋｉｌｂｏｕｍｅ ＥＤ等【９】人研究 也表明Ｓａ单抗和Ｈ株的结合是在ＨＡ蛋白受体结合位点附近的某个位置，这个位置单个的氨基酸的 变化就可以引起病毒抗原性和生物学活性的变化。ｕｎｄｅｎｏｏｄ掣１用１９６８ ｘ３１毒株的突变株进行研 究发现在１４４，１４５，１５８位置上突变可引起受体亲和力下降。本试验的结果也证实了这点。３＃和１８｝｝ 在２５个毒株中致病性较强，不仅其ＥＩＤ５０值最高（分别为１０．８．８硒．２ｌＬ和ｌＯ．８．８加．２ｍＬ）、ＥＬＤ５０值 最高（分别为１０—７．９／０．２ｍＬ和１０—８．７／０．２ｎ儿）、鸡胚平均死亡时间也最短（分别为６６．５ｈ和６９ｈ），而且还 出现了１日龄雏鸡脑内接种指数（ＩＣＰＩ）（分别为０．２３８和Ｏ．４３７）和６周鸡静脉内接种指数（ＩＶｐＩ） （分别为和Ｏ．３４和０．５１）。另外与４株Ｈ９Ｎ２的ＨＡ单抗（２Ａ４、Ｈ６、Ｆ６、Ｃ２）均不发生应。这很 可能与３静和１８＃毒株在氨基酸的第１４５位发生了突变有关，此位氨基酸由ｓ突变为Ｎ，从而使在 １４５ａａ．１４７勰上多了一个糖基化位点ＮＧＴ，影响了ＨＡ的三级结构，破坏了２Ａ４、Ｈ６、Ｆ６、Ｃ２株单 抗针对的ＨＡ抗原表位；该突变位置正位于ＨＡ头部的Ａ抗原位点上，从而导至了生物学活性的改 变。 ３．３ 当前Ｈ９Ｎ２禽流感在我国呈地方流生，不同的毒株之间可产生基因重组，在大量使用疫苗 的免疫压力和自选择下病毒有可能进一步发生遗传变异而出现致病力较强的毒株，甚至还有可能因 ＨＡ裂解位点氨基酸序列改变，使低致病性禽流感毒株突变为高致病性禽流感毒株，造成更大危害。 因此，加强对Ｈ９Ｎ２亚型禽流感生物学特性和分子流行病学研究，掌握其遗传变化的规律，不仅在 病毒学、兽医学等学科上有重要的学术意义，而且在养殖生产和公共卫生等方面也具有重大的现实 意义。 参考文献（略） ３株相隔５到１０年的Ｈ９Ｎ２亚型禽流感病毒ＨＡ基因差异分析 王金良１’２沈志强’’李峰１’２刘吉山１ （１．山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州２５６６００；２．山东绿都生物科技有限公司， 山东滨州２５６６００）  摘要对３株同一地区相隔５到ｌｏ年的Ｈ９Ｎ２亚型禽流感病毒血凝素（ＨＡ）基因进行扩增、测序，通过序列及关键 位点分析，研究Ｈ９Ｎ２亚型流感病毒变异情况．分析测序结果表明：所扩增的ＨＡ基因全长１６８３ ｂｐ，编码５６０个氨 基酸；３个毒株的裂解位点的氨基酸序列均为Ｒ．ｓ．ｓ．Ｒ，属于低致病力毒株；分离株氨基酸推倒序列分析发现均存在 ７个相同的潜在糖基化位点，受体结合位点为禽源性流感病毒特异性序列，左侧壁氨基酸均为ＮＧＱＱＧ，右侧壁均为 ＧＴＳＫＡ。与一些参考毒株的ＨＡ基因序列进行比较分析表明分离株与参考株核苷酸与氨基酸同源率