13(东方)第三章 蛋白质化学2.ppt

1.蛋白质的二级结构 ;① 多肽链螺旋式盘曲上升，螺旋上升一圈含3.6个氨基酸残基，一个螺旋圈高0.54nm，其中每个氨基酸残基沿轴上升0.15nm，每个氨基酸残基沿轴旋转100o。 ;α-螺旋结构的稳定主要靠肽平面之间的氢键。 ;(2) β-折叠（βpleated sheet） ;③β-折叠有平行式和反平行式。平行式β-折叠片的相邻肽链是同向的（都是N→C或C→N），反平行式β-折叠片的相邻肽链是反向的。 平行β-折叠片比反平行β-折叠片更规则。 ;反平行式β-折叠结构更稳定。因为其氢键垂直于肽链。 ;(3) β-转角 (β-turn);(4) 无规卷曲（random coil） ;4. 蛋白质的三级结构;Date;鲸肌红蛋白 (Mb): 1963年J Kendrew阐明 抹香鲸肌红蛋白是具有呼吸作用的蛋白质。是第一个被阐明三级结构的蛋白质。;球状蛋白质三维结构特征： 含丰富的二级结构元件 有明显的折叠层次 分子呈球状或椭球状 疏水侧链埋藏在分子内部，亲水侧链暴露在外表 分子表面常有空穴，是配体结合部位（活性中心）;蛋白质的四级结构;寡聚蛋白质：由两个或两个以上亚基组成的蛋白质。 包括许多重要的酶和转运蛋白。分为： 同寡聚蛋白质：由相同类型亚基组成，每个亚 基称为一个原聚体或原体。 如：肝乙醇脱氢酶，酵母己糖激酶。 杂寡聚蛋白质：由不同类型亚基组成，一组不同亚基合称为一个原体。 如：血红蛋白，天冬氨酸转甲酰酶 ;血红蛋白的四级结构 ;镰刀形红细胞;3.5蛋白质的性质;（1）根据分子组成测定最小分子量;（2）葡聚糖凝胶过滤法分析蛋白质分子量;蛋白质的两性解离; 蛋白质的等电点(Isoelectric point) 当某一蛋白质，在某一pH下所带正、负电荷恰好相等(净电荷为零)时，该pH值称为该蛋白质的等电点。 处于等电点的蛋白质分子在电场中既不向阳极移动，也不向阴极移动；在小于等电点的pH溶液中，蛋白质带正电荷，在电场中向阴极移动；在大于等电点的pH溶液中，蛋白质带负电荷，在电场中向阳极移动。 处于等电点的蛋白质的特殊物理性质：稳定，导电性、溶解度、黏度和渗透压均最小。常利用这一性质测定???白质的等电点、分离纯化蛋白质、鉴定蛋白质的纯度。;蛋白质的胶体性质;+;使蛋白质溶液产生沉淀的因素： ①向蛋白质溶液加脱水剂，破坏水化膜； ②改变蛋白质溶液的pH值，达到蛋白质的等电点； ③向蛋白质溶液中加电解质，中和蛋白质的表面电荷。 ;根据蛋白质胶体颗粒较大的特点，利用透析或超滤法可将蛋白质分离或纯化。 透析(dialysis) 利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。;超滤法 （ultrafiltration） 应用正压力或离心力使蛋白质溶液透过可截留一定分子量蛋白质的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的。;沉淀蛋白质的方法： ⑴ 盐析法（salting out） 向蛋白质溶液中加入大量中性盐，如：（NH4）2SO4 、Na2SO4、NaCl，使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀析出的作用称为盐析。盐析所需中性盐浓度较高，但一般不引起蛋白质变性。除去中性盐后，可复溶。不同蛋白质盐析时所需盐浓度不同，逐渐增加中性盐（常用硫酸铵）的浓度，不同蛋白质就先后盐出，这种方法称为分段盐析。例如血清中加入50%的（NH4）2SO4可使球蛋白析出，加入100%的（NH4）2SO4可使清蛋白析出。 ⑵ 有机溶剂沉淀法：极性有机溶剂甲醇、乙醇或丙酮 ⑶ 重金属盐沉淀法： Hg2+、Pb2+、Cu2+、Ag+等 ⑷ 生物碱试剂和某些酸类沉淀法：鞣酸、苦味酸、三氯乙酸，磺基水杨酸等 ⑸ 加热变性沉淀法;蛋白质变性作用*;蛋白质变性过程中某些理化性质的变化：; 双缩脲反应是蛋白质特有的颜色反应，对含有2个以上肽键的蛋白质有效。肽链越长显色越深。 双缩脲反应阴性，表明无蛋白质；但仅凭双缩脲反应阳性还不能断定是蛋白质，还需其它方法佐证。;蛋白质分离纯化的基本方法：;第三章 蛋白质化学 结束 谢谢！