[医学微生物学]病毒感染的检查方法和防治原则资料.ppt

病毒感染的 检查方法与防治原则;1）掌握病毒的分离培养方法； 2）熟悉标本的采集与送检原则、病毒感染的快速诊断； 3）了解病毒感染的免疫预防、抗病毒治疗。;内 容;第一节;一、标本的采集与运送;:;病毒的分离培养方法：;⑴ 动物接种(animal inoculation);⑵ 鸡胚培养(embryonated egg culture);鸡胚接种部位：;Chick embryo inoculation;Allantoic inoculation is done mainly for production of vaccine of influenza virus. 主要用于流感病毒疫苗的生产;Viral replication produces visible lesions (pocks), grey-white area in the transparent(透明的) allantoic(尿囊的) membrane. ;优点： 易管理 不带微生物 成本较低 缺点： 操作程序复杂 目前用鸡胚培养的病毒主要是流感病毒 ;(3) 细胞培养(cell culture);根据细胞来源、染色体特征及传代次数分: ? 原代培养细胞 ? 二倍体细胞株 ? 传代细胞系或株;①原代培养细胞（primary cultural cells);①原代培养细胞（primary cultural cells);特点: ? 对多种病毒敏感 ? 生长能力有限, 获取成本高 ? 可携带潜伏病毒 应用: ? 病毒分离与鉴定 ? 病毒学实验研究 ? 不能用于制备疫苗;体外分裂50~100代仍保持二倍染色体数目的单型细胞;;:;病毒鉴定：;⑴ 细胞病变效应( cytopathic effect,CPE);①CPE：病毒感染细胞发生形态改变;Syncytium formation in cell culture caused by RSV (top), and measles virus (bottom). ;③CPE：形成包涵体（inclusion body）;Syncytial formation caused by mumps virus and haemadsorption of erythrocytes onto the surface of the cell sheet. ;⑶ 干扰现象（interference）;⑷ 细胞代谢的改变;;病毒鉴定：;:; 病毒数量及感染性测定：;50%组织细胞感染量(50% tissue culture infectious dose, TCID50); 分别为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6倍稀释度的HCMV感染的HEL细胞;蚀(空)斑形成试验（plaque assay） ;PLAQUE ASSAY;PLAQUE ASSAY;PLAQUE ASSAY; 分别为10-1、10-2、10-3倍稀释度的HCMV病毒液感染的HEL细胞;用途： ? 测定感染性病毒量 单位: PFU (plaque forming unit)/ml 由一个感染性病毒颗粒增殖而形成的一个空斑称为空斑形成单位。 ? 分纯病毒;? 已知抗原—测抗体（诊断） ? 已知抗体—测抗原（鉴定病毒属、种、 型、亚型）;(1) 中和试验(Neutralization test) (2) 血凝抑制试验(Hemagglutination inhibition test) (3) 免疫标记法(FIA、EIA、RIA) ⑷ 蛋白印迹(Western blot) ;Immunofluorescense test;Immunofluorescense test;HEL细胞中CMV IE1蛋白的表达;ELISA;AIDS的确诊试验;数小时内出结果 形态学检查 病毒成分（抗原或核酸） 早期抗体检测（IgM）;（一）形态学检查;;呼肠病毒感染回肠上皮细胞电镜照片;Inclusion body;（二）病毒成分检测;（三）早期抗体检测;香港大学专家：患者鼻咽标本→Vero细胞培养→CPE →EM观察：冠状病毒 随后加拿大和美国CDC等SARS国际协作组的多个实验室也培养出了冠状病毒 利用‘免疫荧光法’将分离病毒与SARS患者血清进行血清学检测，反应呈阳性 从冠状病毒基因组的保守区设计引物，采用RT-PCR方法从培养上清中扩增出了冠状病毒基因→测序→经Genbank数据库同源性比对，发现同源性为64%左右;加拿大专家完成了全基因组测序→发现与已知人和动物的冠状病毒的同源性差异较大→确定为一种新的冠状病毒。 荷兰的病毒学家：用这种冠状病毒感染猴子→出现