第二章植物胚胎培养要点.ppt

植物胚胎培养 什么叫胚胎？ 植物在受精后，受精卵形成合子，随即进行第一次分裂，进而形成分生组织和幼胚，再发育成成熟胚 那什么是胚胎培养？ 是指对植物的胚、子房、胚珠、胚乳进行离体培养，使其发育成完整植株的技术 植物胚胎培养 胚胎培养的类型 第一节、植物胚培养 本节内容提要 一、胚培养的类型 二、胚培养的应用 三、幼胚培养方法 四、影响胚培养的因素 一、胚培养 依据所剥离胚的发育时期不同： 子叶形成之前 子叶形成之后 成熟胚培养 成熟胚培养 不依赖胚乳的贮藏营养 只要提供合适的生长条件及打破休眠 在含有大量元素的无机盐和糖的培养基上萌发生长，形成幼苗 成熟胚培养一般较易获得成功 成熟胚培养 、 幼胚培养：是指处于原胚期、球形期、心形期、鱼雷期的胚培养；幼胚完全是异养的，离体条件下培养要求培养基成分复杂，培养不易成功。 幼胚培养的基本程序 取子房 常规表面消毒 解剖镜下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚。 固体培养 幼胚培养 三种生长方式： 胚性发育： 胚只是在体积上增大甚至超过正常胚大小而不能萌发成苗 （往往畸形瘦弱，甚至死亡） 早熟萌发：幼胚不再发育，迅速萌发成幼苗。多数情况一个幼胚萌发成一个植株，有时因细胞分裂形成许多胚状体，进而形成许多植株，即丛生胚现象。 愈伤组织：多数植物幼胚形成愈伤组织。再分化成胚状体或形成芽苗。 台湾红豆杉成熟胚培养 牡丹成熟胚的离体培养与快速繁殖 Mature embryo culture and rapid propagation of tree peony 2、胚培养的应用 一、克服远缘杂交不亲和性 将早期幼胚进行离体培养，可克服受精障碍。 二、打破种子休眠，缩短育种周期 三、提高种子萌发率 针对一些长期营养繁殖的植物种子 四、快速测定种子活力 3、幼胚培养的方法 材料的选择 一般的实验、示范：选大粒种子 希望材料的胚发育时期具一致性：选开花和结实习性有规律性的植物 希望培养某一发育时期的胚：要确定授粉后天数与胚胎发育的相应关系 灭菌：取大田或温室里授粉受精后的植物子房→70%酒精消毒→0.1%氯化汞灭菌（10-30分）→无菌水冲洗（3、4次） 二、幼胚的分离与培养 分离：灭菌材料→切开子房壁→取出胚珠，剥离珠被→于培养基培养 培养：胚离体培养发育时期分为异养期和自养期。在心形期转入自养生长。对于难培养的幼胚，可利用胚乳看护培养。 培养 胚的发育对营养的要求有2个阶段，即： 异养期：这一时期的幼小胚完全依赖胚乳和周围的母体组织提供营养。 自养期：这一时期胚能吸收培养基中的无机盐和糖，经过自身的代谢作用合成其生长必需的物质，在营养上已可以完全独立。 植物胚胎发生过程： 原胚－球形胚－心型胚－鱼雷胚－子叶胚 球形胚前期 心型胚前期 鱼雷胚 球形胚 4、影响胚培养的因素 一）培养基 1、无机盐： 成熟胚培养基相对简单，如White。幼胚培养有MS、B5等，可使K+、Ca2+水平稍高，NH4+的水平变低。 2、碳水化合物： 糖的作用： 调节渗透压；碳源；防止幼胚早萌。 渗透压的保持对于幼胚培养相当重要。最适蔗糖浓度随着胚的发育时期而降低。 胚发育早期要求较高的的渗透压，而随着胚的发育逐渐降低。 3.氨基酸和维生素 无论单一还是复合的氨基酸，都能促进胚生长 维生素对发育初期的幼胚培养是必需的，而对已成长的胚的形态发生有抑制作用 4、植物生长调节剂： 成熟胚一般不需要外源激素即可萌发。但激素能促进休眠胚的萌发。 幼胚需要外源激素，应保持外源激素与内源激素的平衡。过低则不能促进生长，过高则易导致幼胚脱分化形成愈伤。 5、天然有机物； 银杏幼胚培养中添加银杏胚乳有促进作用（1934）；曼佗罗幼胚培养中发现添加椰子乳能很好的促进幼胚的发育(200-500um的幼胚) （1941）。 此外，大麦胚乳、麦芽提取物、酵母提取物、水解酪蛋白等都能促进幼胚的发育。 （二）环境条件 1、温度： 多数为25-30℃，因植物种类有所差别。 2、光照： 一般认为黑暗或弱光条件较为合适。 （三）胚柄-------短命结构 在幼胚培养中，带有胚柄结构有利于幼胚的生长。因为其太小，所以一般较难与胚一起分离出来。 幼胚培养中，胚柄的存在对它的成活是关键 第二节、植物胚乳培养 胚乳培养（Endosperm culture）： 是指将胚乳组织从母体上分离出来，通过离体培养，使其发育成完整植株的技术。 胚乳在被子植物中是双受精的产物，由极核和雄配子结合成的三倍体组织。 而裸子植物胚乳在受精前形成，为单倍体。 仅40多种植物进行胚乳培养研究，20种获得再生植株，如猕猴桃等。多存在混倍现