第六章蛋白质的生物合成1要点.ppt

第六章 生物信息的传递2——从mRNA到蛋白质 Crick的中心法则 ?蛋白质是生物信息通路上的终产物，一个活细胞在任何发育阶段都需要数千种不同的蛋白质。 ?活细胞内时刻进行着各种蛋白质的合成、修饰、运转和降解反应。 蛋白质的生物合成 场所：核糖体； 模板：mRNA； 转移RNA(tRNA)是模板与氨基酸之间的接合体。 蛋白质合成需要多种蛋白质、酶和其他生物大分子的参与。 蛋白质合成是一个需能反应。 ? 翻译是指将mRNA链上的核苷酸从一个特定的起始位点开始，按每3个核苷酸代表一个氨基酸的原则，依次合成一条多肽链的过程。 6. 1 遗传密码——三联子 贮存在DNA上的遗传信息通过mRNA传递到蛋白质上，mRNA与蛋白质之间的联系是通过遗传密码的破译来实现的。 遗传密码：mRNA上每3个核苷酸翻译成多肽链上的一个氨基酸，这3个核苷酸就称为一个密码子（三联子密码）。 The genetic code is triplet-- Key terms Codon is a triplet of nucleotides that represents an amino acid or a termination signal. Genetic code is the correspondence between triplets in DNA (or RNA) and amino acids in protein. Initiation codon is a special codon (usually AUG) used to start synthesis of a protein. ORF is an open reading frame; presumed likely to code for a protein. Reading frame is one of three possible ways of reading a nucleotide sequence as a series of triplets. Termination codon is one of three (UAG, UAA, UGA) that causes protein synthesis to terminate. 6. 1. 1 三联子密码及其破译 ?若以3个核苷酸代表一个氨基酸，有43=64种密码子，满足了编码20种氨基酸的需要。 (-) (-) (-) 一次删去5’-GUA ↓ ↓ ↓ UAC GGA U………3’ 读码框不变 用核苷酸的插入或删除实验证明mRNA模板上每三个核苷酸组成一个密码子。 三联子密码的破译 ? 制备E.coli无细胞合成体系，以均聚物、随机共聚物和特定序列的共聚物模板指导多肽的合成。 ? 核糖体结合技术。 E. coli 无细胞蛋白合成体系(cell-free protein synthesizing system) 1. 用DNase进行裂解细胞以阻止细胞进行新的转录 。 2. 加入mRNAs均聚物如 [poly(A)] + 19 为标记和一个已标记的AA 3. 体外翻译 4. 分析翻译的多肽 均聚物为模板 Nirenberg把多聚（N）作为模板加入到无细胞体系时发现，新合成的多肽链是: poly(U) ---UUU--- polyphenylalanine poly(C) ---CCC--- polyproline poly(A) ---AAA--- polylysine poly(G) --- did not work because of the complex secondary structure 随机共聚物为模板 Poly(UG)---poly(Cys-Val): 5……UGU GUG UGU GUG UGU GUG……3 无论读码从U开始还是从G开始，都只能有UGU（Cys）及GUG（Val）两种密码子。 特定序列的共聚物为模板 ? 只含A、C的共聚核苷酸作模板：→8种三联子编码的Asn、His、Pro、Gln、Thr、Lys 6种氨基酸。 特定序列的共聚物为模板 ? 以多聚（UUC）为模板→UUC苯丙氨、UCU丝氨酸、CUU亮氨酸 核糖体结合技术 ? 以人工合成的三核苷酸如UUU、UCU、UGU等为模板，在含核糖体、AA-tRNA的适当离子强度的反应液中保温后通过硝酸纤维素滤膜。 ? 游离的AA-tRNA因相对分子质量小能自由过膜，与14C标记模板对应的AA-tRNA能与核糖体结合，体积超过膜上的微孔而被滞留。 三核苷酸密码子能使特定的氨基酰-tRNA结合到核糖体上 *数字代表特