第十二章核酶要点.pptVIP

第十二章 核酶 第一节 ribozyme 第二节 脱氧核酶 第一节 ribozyme 一、ribozyme的发现 二、ribozyme的概念 三、ribozyme的种类 四、ribozyme研究进展与展望 20世纪80年代初期，美国科罗拉多大学博尔德分校的T.Cech 在研究四膜虫 rRNA前体的剪接时发现，其 26S RNA 具有自我催化活性，由此提出了核酶的概念。 美国耶鲁大学的S.Altman在大肠杆菌中发现了RNase P具有生物催化功能，从而改变了生物催比剂的传统概念。为此，T.Cech和S.Altman共同获得了1989年度诺贝尔化学奖。 一、ribozyme的发现 四膜虫26S rRNA前体内含子的二级结构以及内含子、外显子的剪接点 核酶的发现：内含子的切除反应发生在含有核苷酸和纯化的26S rRNA前体而不含有任何蛋白质催化剂的溶液中，可能的解释只能是:内含子切除是由26S rRNA前体自身催化的，而不是蛋白质。 核酶的证实：将编码26S rRNA前体DNA克隆到细菌中并且在无细胞系统中转录成26S rRNA前体分子。结果表明这种人工制备的26S rRNA前体分子在没有任何蛋白质催化剂存在的情况下，切除了前体分子中的内含子。这种现象为自我剪接(self-splicing)，这是人类第一次发现RNA具有催化化学反应的活性， 二、ribozyme概念 概念：具有催化功能的RNA分子，是生物催化剂。 又称核酸类酶、酶RNA、 核酶类酶RNA。 特点：核酶的作用底物可以是不同的分子, 或者作用 底物是同一RNA分子中的某些部位。 与蛋白质酶相比：核酶的催化效率较低，是一种较为原始的催化酶。打破了酶是蛋白质的传统观念。 核酶的功能：? 1.?核苷酸转移作用。? 2.?水解反应，即磷酸二酯酶作用。? 3.?磷酸转移反应，类似磷酸转移酶作用。? 4.?脱磷酸作用，即酸性磷酸酶作用。? 5.?RNA内切反应，即RNA限制性内切酶作用。 三、Ribozyme的种类 根据作用方式分为： 剪切型（把RNA前体的多余部分切除）， 剪接型（把RNA前体的内含子部分切除并把不连续的外显子部分连接起来） 根据所作用的底物不同分为： 自体催化（催化分子内反应） 异体催化（催化分子间反应） I型内含子:来源rRNA 剪接型核酶 II型内含子:来源MT RNA 锤头核酶:来源植物病毒 剪切型核酶 发夹核酶 自体催化 丁型肝炎病毒（HDV)核酶：来源人类病毒 RNase P：来源tRNA的成熟 异体催化 根据核酶的结构和催化反应： RNA和蛋白质复合物：核糖核酸酶P。 小分子的RNA：能够进行分子内自我切割反应，且不需蛋白质参与。这些RNA分子可以分为两个部分，一部分是底物，另一部分是酶。将具有酶活性的序列克隆后可制成人工核酶去作用于独立的底物。 Ⅰ、Ⅱ型内含子：将自身从前体mRNA中剪接出去的作用 共同点：都涉及磷酸二酯键的切割或连接。它们作用的底物 是RNA，可以是RNA分子本身，也可以是别的RNA分子。? 几种能进行自我剪切的RNA结构 小分子核酶常见类型：锤头、发夹、HDV 催化特点：产生5-OH、2,3-环状磷酸基末端 I型内含子剪接， 图中的pG可以是GTP、GDP或是GMP 特点：I型需要游离的鸟苷或其磷酸化的衍生物的参与，剪接过程中，内含子先以 线性形式被释放，然后再转变成一个片段和一个环状分子。 Ⅱ 型 内 含 子 剪 接 特点：Ⅱ型内含子的切除要形成套索结构，以套索的形式释放内含子 四、Ribozyme研究进展与展望 对各种已知ribozyme结构与功能关系的研究。 可找出其结构功能域和必需基团，据此可进行分子 改造，以获得分子更小的、高效的ribozyme 。 研究热点：从催化分子内反应的自我剪切ribozyme设 计出催化分子间反应的ribozyme。 1、抗病毒方面的研究 HIV是一种逆转录病毒，是核酶应用研究的理想靶标。HIV主要攻击T淋巴细胞，破坏机体的免疫系统，使抗病能力降低，导致死亡。 Wong等(1998) 利用发卡型核酶抑制HIV-1 基因表达，在一期临床试验中，用带有发夹状核酶的载体体外转染患者的T细胞, 然后再将这些T 细胞重新输入到患者体内