第一章酶的基础知识2技术分析.ppt

第二节?? 酶的作用机理一?、 酶的活性中心二、? 酶的专一性的机理三、? 高效性的机理 1、活性中心的概念 活性中心：酶分子中结合底物并起催化作用的少数氨基酸残基，包括底物结合部位、催化部位 2.酶活性中心的结构特点 （1）活性中心只占酶分子总体积的很小一部分，往往只占整个酶分子体积的1%-2%。 某些酶活性部位的AA残基 酶 AA残基数 活性部位的AA残基 核糖核酸酶 124 His12, His119, Lys41 溶菌酶 129 Asp52, Glu35 胰凝乳蛋白酶 241 His57, Asp102, Ser195 胃蛋白酶 348 Asp32, Asp215 木瓜蛋白酶 212 Cys25, His159 羧肽酶A 307 Arg127, Glu270,Tyr248,Zn2+ （2）酶的活性部位是一个三维实体 （3）酶的活性部位和底物的结合是一个动态辨认过 程（诱导契合，induced-fit） （4）酶的活性部位位于酶分子表面的一个裂隙（crevice）内，裂隙内是一个相当疏水的环境， 从而有利于同底物的结合 （5）底物靠许多弱的键力与酶结合 （6）酶活性部位具有柔性或可运动性 频率最高的活性中心的氨基酸残基：Ser、His、Cys、Tyr、Asp、Glu、Lys。 不需要辅酶的酶：活性中心是由酶分子在三维结构上比较靠近的少数几个氨基酸残基或是这些残基的某些基团组成 。 需要辅酶的酶：辅酶分子或辅酶分子的某一部分结构往往就是活性中心的组成部分 ② 特异性共价修饰 某一种化学试剂专一的修饰酶活性部位的某一氨基酸残基，使酶失活。通过水解分离带标签的肽段，即可判断出被修饰的活性部位的氨基酸残基。 如二异丙基氟磷酸可专一与胰凝乳蛋白酶活性中心的Ser的羟基共价结合  （二）酶作用专一性的机制 1、锁钥学说—lock and key或模板学说（temolate）： 1894年，Fischer提出了该学说，认为酶和底物在结构上严格互补，犹如钥匙与锁的关系，若底物结构稍有变化，就不能与酶结构相吻合。 缺陷： 不能解释酶的多底物现象、酶对正反方向的催化、相对专一性 邻近效应：酶与底物形成中间复合物，使底物之间(如双分子反应）、酶的催化基团与底物之间相互靠近，相当于变分子间反应为分子内反应，提高了反应基团的有效浓度，反应速度大大增加。 酶中某些基团可使底物分子的敏感键中某些基团的电子云密度变化，产生电子张力，使敏感键的一端更加敏感,底物分子发生形变,接近过渡态,降低了底物的活化能 近1/3的酶催化活性需要金属离子，根据金属离子-蛋白质相互作用强度将需金属的酶分为： 金属酶（metalloenzyme):含有紧密结合的金属离子，多属于过渡态金属离子如Fe2+、Cu2+、Zn2+、Mn2+、Co3+ 金属-激活酶（metal-activated enzyme):含松散结合的金属离子，通产为碱和碱土金属离子，如Na+、K+、Mg2+、Ca2+ 金属离子的催化作用： 提高水的亲核性能：金属离子可以和水分子的OH-结合，使水显示出更大的亲核催化性能。 电荷屏蔽作用　许多激酶为ATP-Mg2+复合物。 电子传递中间体：作为酶的辅因子起传递电子的功能。 6、多元催化和协同效应 多个基团催化形式的协同作用。一般包括酸-碱催化，共价催化（亲核催化, 亲电子催化）等。如凝乳蛋白酶：Ser-195亲核催化， His-57酸碱催化等； 溶菌酶催化水解NAM及NAG间的糖苷键 O18水中水解作用指出溶菌酶催化底物C1-O键裂解 溶菌酶的催化作用 第一步是质子转移,糖苷键被裂解,形成一个正碳离子中间物 形成碳正离子时葡萄糖环的形变 溶菌酶催化作用 第二步是OH-和H+分别加合到正碳离子中间物和Glu35的侧链后,水解反应完成 羧肽酶A的作用机制 羧肽酶A在结合底物后发生变化 羧肽酶A裂解模式底物苯甲酰甘氨酰苯丙氨酸的机制 丝氨酸蛋白酶举例 胰凝乳蛋白酶 的作用机理 胰凝乳蛋白酶结构 胰凝乳蛋白酶的活性中心 胰凝乳蛋白酶分子中催化中的三联体构象 除了胰凝乳蛋白酶外，在催化中具有“天冬氨酸-组氨酸-丝氨酸”电荷按力网的酶还有：胰蛋白酶、弹性蛋白酶及枯草杆菌蛋白酶 第三节?? 酶促反应动力学 是研究