游离脂肪酸对3T3-L1脂肪细胞糖代谢影响地研究论文.docVIP

摘  要  研究目的：通过培养 3T3-L1 前脂肪细胞，并诱导其分化至成熟，研究游离脂肪酸（FFA）对 脂肪细胞糖代谢的影响。通过检测 3T3-L1 前脂肪细胞分化成熟过程中，细胞内活性氧（ROS） 浓度的变化，反应细胞内自由基的变化。 研究方法：培养 3T3-L1 前脂肪细胞，通过 IBMX、胰岛素、地塞米松的联合诱导，细胞由梭 形转变为大而圆、充满脂滴的脂肪细胞，表明细胞分化成熟。用油红 O 染色鉴定并比较其形 态结构的变化。通过不同的 FFA（LPS、EPA、SA、PA）干预成熟脂肪细胞，用 MTT 法检测细 胞不同游离脂肪酸刺激细胞 48 小时后，脂肪细胞的存活率。同时，用含 FFA（LPS、EPA、 SA、PA）的 DMEM 干预成熟脂肪细胞 6h、12h、24h、48h 时收集培养基，葡萄糖氧化酶法算 出各组脂肪细胞的葡萄糖消耗量。检测诱导不同时间脂肪细胞内活性氧浓度的变化。对成熟 的脂肪细胞，通过 Western blot 检测不同时间各组 FFA 干预后细胞 AMPK、GLUT4 蛋白含量。 研究结果： 诱导分化前的 3T3-L1 前脂肪细胞，呈梭形，胞浆中无脂滴，表现为成纤维细胞样的形态， 细胞生长至接触抑制后，处于生长停滞期；诱导分化第 2 天，细胞形态变圆，但胞浆中无明 显脂滴出现；诱导分化第 4 天，细胞变大变圆，胞浆中有少量脂滴出现在细胞核周围，油红 O 染色鉴定可以观察到脂肪细胞胞浆中的脂滴染成红色；第 6 天时，脂肪细胞进一步变大变 圆，小脂滴明显增多，聚集在细胞核周围，开始出现“戒环”样结构；诱导分化第 8 天，90% 以上细胞均分化成熟，更多的脂滴聚集，部分小脂滴相互融合，形成大的脂滴。 ②含 LPS、EPA、SA、PA 的培养基作用于成熟脂肪细胞，随着时间的延长，显著抑制脂肪细 胞对葡萄糖的吸收（P0.01）。 3T3-L1 前脂肪细胞在诱导的第 8 天，细胞数目最多，活性最好，诱导从第 0 天到第 8 天 的过程中，脂肪细胞内活性氧浓度逐渐升高，到第 8 天达到峰值。继续诱导，随着细胞本身 活力的减少，细胞出现老化现象，同时，脂肪细胞内活性氧浓度也逐渐降低。 含 LPS、EPA、SA、PA 的培养基作用于成熟脂肪细胞，随着时间的延长，脂肪细胞 AMPK、 GLUT4 蛋白含量在减少。 结论：脂肪细胞内活性氧浓度的变化可以反映细胞的生存状态，游离脂肪酸可以诱导胰岛素 抵抗的分子机制可能是通过胰岛素信号通路激活蛋白激酶（AMPK），进而影响 GLUT4 的蛋白 表达，使脂肪细胞的葡萄糖吸收率减低，影响脂肪细胞的糖代谢。 关键词：游离脂肪酸；3T3-L1 脂肪细胞；葡萄糖消耗；GLUT4 I Abstract Objective: Through the cultivation of 3T3-L1 preadipocytes, and induction of differentiation to mature study of free fatty acids (FFA) on glucose metabolism. By etecting the 3T3-L1 preadipocytes during differentiation and maturation of intracellular reactive oxygen species (ROS) concentration, intracellular free radical reactions. Methods: Cultured 3T3-L1 preadipocytes by IBMX, insulin, induced by the combination of dexamethasone, cells from the spindle into a big, round and full of lipid droplets in fat cells, that cell differentiation. Oil red O staining and compared the morphological changes in the structure. Through different FFA (LPS, EPA, SA, PA) intervention mature fat cells, different cells with MTT assay of free fatty acids stimulate cell for 48 hours, the survival rate of f