中药复方宫炎净中主要有效成分的提取和抗炎活性研究.pdf

万方数据 Extraction and anti inflammatory activity of main effective components of Chinese herbal compound Gongyanjing in dairy cows A Dissertation Submitted to Shihezi University In Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Agriculture By LI Xiaozhen (Clinical Veterinary Medicine) Dissertation Supervisor: Prof. Gu Xin-Li Prof. Li Bing-Qi May, 2014 万方数据 万方数据 万方数据 万方数据 I 摘 要 目的：本试验通过不同溶剂对中药复方宫炎净进行提取，测定各提取物不同浓度下的体外抑菌作用， 确定体外抑菌较好的提取物及其浓度；通过活性试验，确定用于提取中药复方宫炎净的溶剂以及最 佳的用药剂量；确定中药复方宫炎净有效成分，采用 L9 (34) 设计正交实验优化复方宫炎净的提取工 艺。为中药复方宫炎净的进一步开发利用、研制新剂型奠定基础。 方法：试验一：采用渗漉法，分别用石油醚、70%乙醇、蒸馏水对复方宫炎净进行提取，采用琼脂 打孔法，通过比较抑菌圈的大小来判断不同溶剂提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、 链球菌的抑菌活性大小。以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为供试菌，测定复方宫炎净醇提物、水提物 的最小抑菌浓度，同时探讨了培养基 pH、培养基含糖量以及温度和紫外线对醇提物、水提物抑菌活 性的影响。试验二：分别给予小鼠生理盐水、地塞米松及高、中、低剂量的石油醚提取物、乙醇提 取物、水提取物，用二甲苯致炎，测定小鼠耳廓肿胀率。此外，腹腔注射体积分数为 0.7%的冰醋酸 致炎，于 590 nm 波长处测腹腔液 OD 值。试验三：建立二甲苯所致耳廓肿胀、蛋清所致足趾肿胀、 棉球所致肉芽肿小鼠炎症模型，通过测定小鼠耳廓肿胀率、足趾肿胀率以及棉球所致肉芽组织重来 判定乙醇提取物的抗炎效果。试验四：通过探究乙醇体积分数、超声提取时间、超声提取次数以及 料液比等单因素对提取效果的影响试验，以盐酸水苏碱为标准品，采用 L9(34)正交设计法优选复方 中总生物碱的提取工艺。 结果：试验一：醇提物、水提物抑菌效果较好。醇提物对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为 0.00625 g/mL，对大肠杆菌和枯草杆菌的最低抑菌浓度为 0.125 g/mL；水提物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌 的最低抑菌浓度为 0.125 g/mL。温度和紫外线处理对乙醇提取物、水提物抑菌效果没有明显影响； 随培养基的 pH 值增大两种溶剂提取物抑菌活性均减弱，随培养基含糖量的增加，两种溶剂提取物 的抑菌活性均呈现增强趋势。试验二：乙醇提取物各剂量组的耳廓肿胀率均显著低于生理盐水组和 石油醚组 （P0.01），并以乙醇中剂量提取物效果最佳；乙醇提取物各组和地塞米松组的腹腔毛细 血管通透性均极显著低于除地塞米松组外的各组（P0.01），并且乙醇中剂量组显著低于地塞米松组 （P0.05）。显示乙醇可作为提取该复方有效成分的最佳提取溶剂。试验三：中剂量乙醇提取物能够 显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀率，显著低于高、低剂量乙醇提取物组（P0.05），与地塞米松组 差异不显著（P0.05）；各组均能明显降低蛋清所致小鼠足趾肿胀率，其中中剂量乙醇提取物组显著 低于高、低剂量乙醇提取物组（P0.05），极显著低于生理盐水组（P0.01），与地塞米松组差异不 显著（P0.05）；中剂量乙醇提取物能明显抑制棉球所致小鼠肉芽组织增生且显著低于高、低剂量乙 醇提取物组（P0.05），极显著低于生理盐水组（P0.01），与地塞米松组差异不显著（P0.05）。试 验四：乙醇体积分数为 70%，超声提取时间为 25 min，超声提取 3 次，料液比为 1:10 时为中药复方 宫炎净中总生物碱的最佳提取工艺。并且在影响奶牛中药复方宫炎净中生物碱提取的因素中，影响 大小依次为料液比、溶剂浓度、超声提取次数、超声提取时间。 结论：以 70%乙醇为溶剂的提取物具有较好的体外抑菌作用和体内抗炎作用，并以乙醇体积分数为 70%，超声提取时间为 25 min，超声提取 3 次，料液比为 1:10 时为中药复方宫炎净的最佳提取工艺。 关键词：中药复方宫炎净；提取物；抑菌活性；小鼠；提取工艺 万方数据 II 万方数据