特殊染色法精读.ppt

实验四 特殊染色法 实验目的要求 了解抗酸染色法、芽胞染色法的原理 熟悉抗酸染色法、芽胞染色法的方法以及意义 实验材料与方法 材料: 菌种：卡介苗、枯草杆菌培养物 染液：抗酸染色液、芽胞染色液 其他：玻片、接种环、酒精灯 无菌生理盐水、显微镜等 方法： 细菌涂片的制作：涂片、干燥、固定 　　染色：抗酸染色法、芽胞染色法 油镜使用：观察染色结果并记录 （一）抗酸染色法 ★抗酸性细菌如结核杆菌等分枝杆菌属细菌，细菌细胞壁有很多脂类物质，石碳酸复红加温染色后，其中的分枝菌酸与石碳酸复红结合成牢固的复合物，能够抵抗盐酸酒精的脱色，使菌体保留红色，故称抗酸染色法。 ★其他非抗酸菌和组织细胞因不能抵抗盐酸酒精的脱色，被脱成无色，后经碱性美兰染色后染成兰。 2、抗酸染色方法 染液组成： 石碳酸复红、3％盐酸酒精、碱性美兰染液 染色方法： 注意事项 1、加温染色时：在火焰上方保持一定高度，加热至出现蒸气（注意不能使染液沸腾），如此反复2~3次（约5min）。在加热过程中要防止将染液烘干，应及时添加染液。 2、脱色时：用3%盐酸酒精脱色，直到流下的液体无色为止，进行水洗。 3、抗酸染色结果及意义 结果： 　　红色－－抗酸染色阳性菌 　　 兰色－－抗酸染色阴性菌 意义： 用于鉴定分枝杆菌属细菌以及某些放线菌 结核分枝杆菌（抗酸染色） （二）芽胞染色法 ★芽胞是细菌在不良的环境条件下形成的休眠体。细菌能否形成芽胞以及芽胞的形状、芽胞的位置、是否膨大等特征是鉴定细菌的重要依据之一。 由于芽胞壁厚，通透性差，不易着色。为了能使芽胞着色便于观察，特用芽胞染色法。 其基本原理是：用着色性强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅可以进入菌体也可进入芽胞内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽胞一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽胞仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽胞囊被染成复染剂的颜色，使芽胞和菌体更易区别。 2、芽胞染色方法 染液组成： 5％孔雀绿水溶液、 0.5％番红染液复染 染色方法： 3、芽胞染色结果及意义 结果： 　 芽胞－－绿色 　　菌体及芽胞囊－－红色 意义： 　用于观察芽胞的形态特征以及鉴定细菌。 注意事项 1、加温染色时应及时添加染液，防止染液干涸。 2、进行水洗时，用细水流冲洗菌膜上方，让水流淌过菌膜，避免将菌膜冲掉。 * * * * 1、原理 石碳酸复 红 初染 3％盐酸酒精 脱 色 碱性美兰 复 染 加温染5分钟 1-2min 影响抗酸染色的关键步骤是脱色 冷却后水洗 水洗 水洗 干燥 1~3min 1、原理 加数滴孔雀绿染液于涂片上 待玻片冷却后 水 洗 番红染液复染 微火加热至染料冒蒸汽 用缓流自流水冲洗 维持5分钟 至流出水无色 水洗 干燥 2min