奥拉西坦对咪达唑仑在大鼠体内药代动力学影响.pdfVIP

中文摘要 奥拉西坦对咪达唑仑在大鼠体内药代动力学的影响 摘 要 目的：咪达唑仑属苯二氮卓类短效镇静剂，具有镇静、催眠、抗焦虑、 抗惊厥、肌松和顺行性遗忘作用，临床常用于外科病人手术麻醉、ICU病 人及机械通气病人的镇静治疗药物。咪达唑仑主要在肝脏经肝微粒体酶 CYP3A4代谢，国内对其药代动力学和生物等效性的研究较多。 奥拉西坦是一种环丫-氨基丁酸类促智药，临床常用于年老痴呆、多梗 死性引发的痴呆及脑神经症、脑外伤等疾病的治疗。该药作用于谷氨酸盐 促代谢受体，防止谷氨酸所致的神经毒性，在体内广泛分布，其中以肝脏、 肾脏及肺内的浓度最高。目前，尚未见奥拉西坦对肝微粒体酶的影响相关 研究。 本研究拟建立简便易行的大鼠血浆中咪达唑仑的R-HPLC检测方法， 大鼠在分别给予奥拉西坦和安慰剂使其达稳态后，再给予咪达唑仑，通过 测定咪达唑仑的浓度，考察在大鼠体内奥拉西坦对咪达唑仑是否产生影 响，从而确定奥拉西坦是否影响肝微粒体酶CYP3A4的活性，为临床联 合用药提供理论依据。 方法： 1给药方法及血浆样品采集 健康雄性SD大鼠40只，随机分为2组，每组20只。实验组每日1 次灌胃奥拉西坦(200 mg·kg。1)，连续5天；对照组每天1次灌胃等量蒸 馏水，连续5天。第6日，两组大鼠均静脉给予咪达唑仑10mg·k91，于 不同的时间点取血，．40℃保存。 2血浆样品处理 取血浆200J_tl，加内标(150mg·L。1地西泮溶液)20Itl，混匀后，加提 取剂500pl(异丙醇：乙酸乙酯=2：8)，涡旋震荡lmin，10000rpm离心5min， 取上清液500I_tl，于37℃水浴氮气流吹干，1001al甲醇复溶，进样。 3色谱条件 Diamonsil C18色谱柱(250 mmx4．6 mm，5．O岬)，柱温30℃，流动 相乙腈一水(62：38)，流速1．0ml／min，检测波长225nm，进样量201al，内 中文摘要 标为地西泮。 4最低定量限及最低检测限的确定 lmg·L一的咪达唑仑对照品溶液，以倍比稀释法稀释后注入色谱仪进 行测定，直至S／N10即为最低定量限，S／N3为最低检测限。 5标准曲线的制备 配制浓度分别为0．10、O．25、1、5、lO、20、30mg·L‘1的咪达唑仑模 拟血浆样品，按“血浆样品处理方法”处理后进样。以咪达唑仑的峰面积与 内标的峰面积比值(Y)对血浆药物浓度(X)进行回归，得标准曲线方 程。 6回收率 制备浓度分别为O．25、5、20mg·L‘1的咪达唑仑模拟血浆样品，按照“血 浆样品处理方法”处理后进样，以咪达唑仑峰面积与等量咪达唑仑对照品 溶液直接进样的峰面积比值，为咪达唑仑的提取回收率；地西泮峰面积与 等量地西泮溶液直接进样的峰面积比值，为内标提取回收率；根据标准曲 线方程计算的测得浓度与加入理论浓度的比值，为方法回收率。 7精密度 分别制备低、中、高三种浓度的咪达唑仑模拟血浆样品，分别于一日 内处理并测定，计算臼内精密度；连续5天处理并测定，计算日问精密度。 8稳定性 5mg·L。1的咪达唑仑模拟血浆样品，按照“血浆样品处理方法”处理后， 分别于O、1、2、3、4h测定，考察处理样品放置的稳定性；即刻处理并 测定或．40。C保存5天后处理并测定，考察低温保存稳定性；即刻处理并 测定或反复冻融3次后处理测定，考察反复冻融稳定性。 9药代动力学分析 根据标准曲线方程计算每只动物各个时间点的血浆药物浓度，采用 DAS2．1．1药代动力学软件处理血药浓度．时间数据，自动拟合统计距，分 别得到两组大鼠的药动学参数，并采用SPSSl3．1统计学软件计算两组间 参数差异有无统计学意义。 结果： 1咪达唑仑保留时间为6．7min，地西泮保留时间为8．2rain，血浆内 源性物质不干扰咪达唑仑和地西泮的测定。 中文摘要 2咪达唑仑血浆药物浓度标准曲线方程：Y=0．0752X一0．0042(线性范 围O．1-一30mg·L～，r=0．9999)，最低定量限为0．005 mg·L～，最低检测限为 0．001 mg·L～。 3回收率：低、中、高三种不同浓度的咪达唑仑模拟血浆样品的提取 回收率分别(85．31+4．49)％，(83．27+2．73)％和(90．71+7．43)％；内标 提取回收率为(76．464-1．09)％；方法回收率分别为(109．84-4．54)％， (101．64-3．28)％和(104．94-4．30)％。 4精密度：日内精密度结果显示，低、中、高三种浓度血浆样品的 RSD值分别为1 1．05％，3．23％和6．38％；日间精密度的RSD值分别为 8．10％，4．68％和7．04％。 5稳定性：血浆样品低温保存5天或反复冻融3次性质稳定，处理血 浆样品放置4h对测定无影响。 6药代动力学特