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大黄中大黄素和大黄酚提取工艺研究 【摘要】目的：探讨大黄中大黄素和大黄酚提取工艺研究，以期为大黄的开发利用提供一定的参考。方法：采用药典方法检查大黄中大黄素和大黄酚的含量，并采用正交实验法对大黄中大黄素和大黄酚的提取工艺进行优化。结果：当乙醇浓度为80%，料液比为10：1，提取时间为40min，提取次数为2次时，大黄素和大黄酚的提取工艺最佳，总量为1.08%。结论：采用正交实验法对大黄中大黄素和大黄酚的提取工艺进行优化，可以很好的对大黄素和大黄酚进行提取，有利于大黄的质量控制和开发利用。 【关键词】大黄;大黄素;大黄酚;提取工艺 大黄药材为蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L.）、唐古特大黄（Rheum tanguticum Maxim. ex Balf.）或药用大黄（Rheum officinale Baill.）的干燥根及根茎，具有泻下攻积、泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等疗效[1]。现代研究也表明，大黄含有蒽醌、鞣质、有机酸、挥发油及多糖等化学成分，具有抗炎、保肝、保护胃黏膜、利尿、改善肾功能、降血压、抗病毒、祛痰和抗肿瘤等功效[2-4]。大黄素和大黄酚作为大黄的指标性成分，对大黄的质量控制和药效发挥起着重要的作用。本文采用药典方法检查大黄中大黄素和大黄酚的含量，并采用正交实验法对大黄中大黄素和大黄酚的提取工艺进行了优化，以期为大黄的开发利用提供一定的参考。 1 材料、试剂与仪器 1.1材料与试剂 大黄购自北京同仁堂药材公司。大黄素对照品（中国食品药品检定研究院，含量：98.7% ，批号：110756-201512）;大黄酚对照品（中国食品药品检定研究院，含量：99.5% ，批号：110796-201118），乙腈为色谱纯，购自sigma公司，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。 1.2 仪器 LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津公司），配置四元泵、自动进样器和柱温箱，UV检测器;岛津AUW120D十万分之一电子天平（日本岛津公司）;纯水仪：Milli-Q纯水系统（美国Millipore公司）;WH-866型旋涡混匀器（江苏太仓华利达实验室设备公司）;KH-250B型超声仪（昆山禾创超声仪器有限公司） 2 实验方法 2.1 液相条件 色谱柱：Waters symmetry C18 （150mm×4.6 mm，5 μm）;流动相：A相（甲醇）-B相（0.1%磷酸溶液） 85：15。检测波长：254nm，流速：1.0 ml/min;柱温：30℃;进样量：10μL。 2.2 线性和范围 分别精密称取大黄素、大黄酚对照品适量，用甲醇溶解并定容至10ml，配制成浓度分别为1.02mg/ml和0.98mg/ml的对照品母液，分别取适量上述对照品溶液各1ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，得大黄素和大黄酚浓度分别为102.1和98.8ug/ml的对照品混合溶液，并用甲醇稀释成系列对照品溶液。按照“2.1”方法进样对照溶液，记录色谱图及峰面积。以浓度（μg/ml）对峰面积（A）进行线性回归，得到大黄素回归方程为A 11135.9C+2051.2（r 0.9995），大黄素在1.02～102.0μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系;大黄酚回归方程为A 16887.7C+1988.6（r 0.9998），大黄酚在0.99～98.8μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。 2.3 样品提取方法 取大黄药材饮片50g，精密称定，置磨口圆底烧瓶中，精密加入乙醇适量，加热回流数小时，放冷，摇匀滤过，精密量取续滤液10ml，其余操作均按照药典方法制备样品。 2.4 正交试验设计 本试验结合预实验结果拟以乙醇浓度、乙醇用量、提取时间和提取次数为考察因素，进行试验正交设计，优化大黄蒽醌类最佳提取工艺，具体参数详见表1。将得到的提取物按照“2.1”方法进样对照溶液，记录色谱图及峰面积，计算大黄素和大黄酚的含量。 表1 正交试验水平表 3 结果 3.1 正交试验结果 表2 正交试验结果 由表2可知，影响大黄素和大黄酚提取效果的因素由高到低为Dgt;Bgt;Cgt;A，最佳提取工艺为A3B3B2D3，即乙醇浓度为80%，料液比为10：1，提取时间为40min，提取次数为3次，结合时间情况，乙醇浓度可以选择80%，料液比为10：1，提取时间为40min，提取次数为2次，作为最佳工艺。 3.2 工艺验证试验 按照确定的工艺条件进行大黄素和大黄酚的提取，并将得到的提取物按照“2.1”方法进样对照溶液，记录色谱图及峰面积，重复三次。计算大黄素和大黄酚的含量。结果发现，按照最佳工艺提取黄素和大黄酚的总量均值为1.08%，RSD值小于2.0%。 4 结论与讨论 大黄中有效成分为大黄总蒽醌，包括大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚及其苷等