大鼠骨髓间质干细胞的体外分离培养与鉴定.docVIP

大鼠骨髓间质干细胞的体外分离培养与鉴定 　　[摘要] 目的 体外培养大鼠骨髓间质干细胞（BMSCs），并进行形态学观察、表面分子标记和多向分化能力的检测鉴定。方法 采用全骨髓贴壁法分离培养大鼠BMSCs，显微镜下进行形态学观察，流式细胞仪检测细胞表面标记物CD29、CD44、CD45，并诱导大鼠BMSCs向成骨和成脂分化。 结果 分离培养的细胞以梭形细胞为主，呈漩涡状生长。CD29、CD44 均呈阳性表达，而CD45呈阴性。成脂成骨诱导后，油红O和茜素红S染色均呈阳性。 结论 全骨髓贴壁培养法分离培养的细胞具有间质干细胞的生物学特性，具有多向分化潜能。 　　[关键词] 骨髓间质干细胞；分离培养；鉴定 　　[中图分类号] R346 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2015）05（b）-0174-03 　　Rat Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Vitro Cultivation and Appraisal 　　ZHANG Ai-xia 1，2 　　1.Life science college of Jiaying University， Meizhou，Guangdong Province，514015 China；2.Center for Stem Cell Biology and Tissue Engineering Sun Yat-Sen University， Zhongshan， Guangdong Province，510080 China 　　[Abstract] Objective To establish the rat bone marrow mesenchymal stem cells （BMSCs） separation of training method， and morphological observation， phenotype and multi-directional differentiation ability of detecting. Methods He whole bone marrow adherent cultivation method in rat BMSCs， morphological observation under a microscope， flow cytometry instrument to detect cell surface markers CD29， CD44， CD45， and induced to osteogenesis and into fat rat BMSCs differentiation. Results The cells cultured separation is given priority to with spindle cells， a swirling growth. CD29， CD44 were positive expression and CD45 were negative. Into fat osteogenesis after induction， oil red O and alizarin red S staining were positive. Conclusion The whole bone marrow adherent cultivation method of separation of cells with the biological characteristics of mesenchymal stem cells， with multi-directional differentiation potential. 　　[Key words] Bone marrow mesenchymal stem cells； The separation of culture； Identification 　　BMSCs作为多能干细胞的一种，由于其取材方便，具有多向分化潜能，有较弱的免疫抗原性，体内植入反应较弱，正逐渐受到学者们的广泛关注。BMSCs不仅可以分化为成骨细胞、脂肪细胞、肌细胞等[1-2]中胚层来源的细胞，它还具有强大的横向分化潜能，除了向间质组织分化外，BMSCs还可跨越胚层限制向外胚层的神经元、神经胶质细胞等外胚层分化，向胰岛样细胞、肝细胞等内胚层来源的细胞分化。BMSCs的细胞增殖分裂模式使外源基因易于导入和表达，BMSCs已成为重要的再生医学种子细胞[3-4]，具有重要的临床应用前景。 　　体外成功分离培养BMSCs是实验研究和临床应用的重要前提。该实验应用全骨髓贴壁培养法