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痰液标本细菌学检验若干问题 　　摘要：目的： 通过对痰液标本细菌学检验问题的研究，建立规范的痰液标本细菌学的检验技术。方法： 取本院检验科细菌室在2011年1月―2014年12月采集的标本10012例，痰液标本为5799例， 认真观察和探索痰液标本的细菌学检验的全过程。结果： 一般的细菌培养，适合同时应用巧克力平板和血平板。提倡试用“12级法”，应用常规化的半定量的培养方式。直接涂片和细菌培养革兰氏染色镜检适合同时进行。实验室判定“自然咳痰”的方法采集标本的感染菌，应该按照当地不同年龄段的“健康人群”的口咽部的分泌物的细菌的半定量的调查结果和临床痰液的标本的细菌学检查的结果进行比较而定。适用“认真对病理成分的选取”，对痰液标本的“前处理”问题还值得进一步探讨。结论： 应该规定医务人员要当面监督和指导痰液标本的取送，这样有利于保证痰液标本的质量；涂片―培养同时并举、“12级法”的半定量法、正确选择病原菌对临床检验有重要意义 。 　　关键词： 痰液标本；细菌学检验；若干问题 　　痰液标本在涂片的检查与细菌的培养的总标本中占50%以上[1]。在健康的人群中，下呼吸道是无菌的，但上呼吸道具有正常菌群的生长，所以，在收集痰液标本使用自然咯痰法时，很容易受到上消化道中分泌物中的正常菌群的污染，“感染菌”的准确识别就受到影响。[2]另外，痰液的标本有“非均质性”的特点，使细菌成分分布比较不均匀，所以导致涂片、培养的检查重复性比较差。所以对痰液标本的检验是临床检验科工作中的一个难点和重点。为了增强细菌的培养与涂片检查的结果的准确性和有效性，逐步实现操作的规范化、科学化和标准化，本文在这方面做了一写探讨和总结，报道如下。 　　1 材料和方法 　　1.1材料 （1）423例不同年龄段的“健康人群”的口咽部的分泌物拭子。（2）临床科室送来的自然咯痰法采集的痰液。 　　1.2 微生物细菌学的检验 直接涂片法“7级法”和半定量的培养“12级法”同时进行微生物细菌学的检验。 　　1.3 统计学的分析方法 采用SPSS16.0软件系统对数据进行分析，计量资料间采用t检验，计数资料间采用x2检验，P0.05为差异有统计学意义。 　　2结果 　　2.1 本院检验科细菌室在2011年1月―2014年12月，本院执行医务工作者当面监督和指导痰液标本取送后，痰液标本的微生物检测情况。见表1。 　　2.2 在健康的人群中携带非厌氧菌的平均数量和几率分别为：非脑膜炎的淋病奈瑟菌为0.34（100%）；非β溶血链球菌为0.44（100%）；微球菌小于0.1（75%）；棒状杆菌小于0.1（65.0%）；肺炎链球菌小于0.1（7.3%）；β-溶血性链球菌0.16（0.6%）；革兰氏阴性杆菌小于0.1（32%）；凝固酶的阴性葡萄球菌小于0.1（27%）；凝固酶的阳性葡萄球菌为0.11（7.4%）。 　　3 讨论 　　3.1 “前处理”痰液标本的问题 提倡痰液标本用无菌生理盐水冲洗，研磨或直接选取痰液标本在血平板上接种；中第二版提倡痰液标本在培养前要均质化和洗净处理。实践证明[3-4]， 痰液的标本中的黏液性、脓血性、凝块状等病理的成分用直接选取标本的方法，省事又省时，可以使阳性检出率提高，比较适合临床检验应用。而均质化和洗净处理费事费时，并且增加了污染的机会，还可以使一部分感染菌丢失，不能在临床的微生物检验中得以普及。 　　3.2 培养基的问题 对痰液标本的细菌培养，《中华医学检验全书》中要求只接种于血平板，而《中国临床检验操作规程》中第二版要求使用巧克力平板、血平板、TTC沙保罗平板等，由实践说明，包括真菌在内的绝大部分细菌都能在血平板上生长，对于奈瑟菌、嗜血杆菌、肺炎链球菌、卡他布兰菌来说，同时应用巧克力平板更有利于致病菌的培养和分离。所以，在选择培养基的问题上要以既省费用又保证质量为原则来选择血平板和巧克力平板。 　　3.3 半定量的培养 在临床上收集痰液的标本的方法比较多，[5-6]但是临床上常使用的是自然咯痰法，很容易造成上呼吸道正常菌群污染，导致感染菌识别和判定、培养和分离的困难。为了克服这一难题，本院逐步建立了“12级法”的半定量培养，有效把握住了解决这一难题的关键：（1）把握住上呼吸道正常菌群的数量和种类，以及携带的几率；（2）做到检验结果定量化。“12级法”应用看似复杂，但常用不过数级，比较而言相对简便准确，建议临床试用。 　　3.4 直接涂片―细菌培养并举的优点 我院多年来使用直接涂片和细菌培养革兰氏染色镜检查同时进行，发现了以下优点：（1）能够准确的判断痰液标本的质量；（2）利于诊断真菌的感染；（3）利于识别其他的感染菌；（4）利于相互弥补，从而使阳性的检出率提高。 　　3.5 识别感染菌 [7-8] 非脑膜炎的淋病