粮食检验 储粮真菌的检测-孢子计数法-编制说明.docVIP

粮食检验 储粮真菌的检测 -孢子计数法 标准编制说明 国家粮食局标准质量中心 国家粮食局科学研究院 粮食检验 储粮真菌的检测-孢子计数法 1. 工作概况 1.1 项目背景和来源 我国是粮食储备大国，储备粮的安全是关系国计民生的头等大事。在储粮过程中真菌的危害是造成粮食损失的一个主要原因。预防储粮真菌危害最为有效的方法，就是早发现、早处理，将危害控制在萌芽状态。因此，储粮真菌危害的早期检测是解决这个问题的关键，但目前这项技术仍是制约全球各国安全储粮的一个瓶颈。近几十年来，国内外相关研究有很多报道，利用真菌某些特定的化学成分或代谢物质检测，进行储粮真菌危害的预报，是用的最多的一种方法，如细胞壁多糖、麦角甾醇、真菌酶类及一些真菌挥发性物质等的检测。但这些成果多数仍处于研究阶段，实际应用较少。 项目承担单位对储粮真菌危害早期检测方法进行了研究，并建立了一个储粮真菌危害快速的早期检测方法。该方法的特点是在传统的细胞计数法基础上，通过对真菌孢子检测浓度设限（1.0×105个/g），消除了样品自身携带真菌孢子的干扰，达到仅检测在储粮中生长的危害真菌的目的。方法可用于检测粮堆发热之前真菌生长变化的情况。 本标准的研究工作经历5年多的时间，包括三个阶段的研究过程。首先进行方法条件优化；通过12家检测单位进行方法验证，最后通过了标准中心组织的方法比对试验。 在上述几个阶段研究的基础上，编制了《粮食检验 储粮真菌的检测-孢子计数法》（征求意见稿）标准文本及其编制说明。 1.2 主要工作过程 1.2.1标准研究 本标准历经5年多时间，研究工作共分三个阶段，首先进行方法条件优化；通过12家检测单位进行方法验证，最后通过了标准中心组织的方法比对试验。 第一阶段的研究，主要是对检测方法进行优化，通过不同粮食样品的检测，对称样量、振荡时间、筛网孔径等因素进行优化；第二阶段研究，主要开展多家单位的方法验证，国家、省、直辖市八家检测单位参加了验证工作，考察方法的再现性。第三阶段研究主要开展方法的比对试验，由标准中心组织，9家省粮油质检站技术骨干参加方法比对试验，反映该方法与粮食微生物的相关性。 1.2.2 标准制定 成立标准工作组； 编写标准讨论稿； 编写标准征求意见稿和编制说明，征求粮油标委会全体委员及国家有关管理部门意见； 2.行业标准编制原则 《粮食检验 储粮真菌的检测-孢子计数法》是建立在科学研究基础上，为储粮行业服务，切实保障我国储备粮安全及企业经济利益的一项技术性标准。标准编制过程中主要遵循以下原则： 以大量的实验室及基层检测人员检测数据为基础，首次制定《粮食检验 储粮真菌的检测-孢子计数法》标准。 广泛征求行业主管部门和储藏安全评价技术专家的意见，并进行修改完善。 文本编写按照GB/T 1.1-2000《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则》及GB/T 1.2-2002《标准化工作导则 第2部分：标准中规范性技术要素内容的确定方法》的要求进行。 3主要研究内容及试验结果综述 3.1概要 本方法是在传统的细胞计数法基础上，经改进，建立的一种用于储粮真菌危害早期快速检测的新方法。本方法特点是，对样品真菌孢子提取浓度设在105个/g以上，以消除了样品中携带真菌孢子的干扰，达到对储粮危害真菌快速检测的目的。 3.2研究内容 3.2.1 提取条件优化 1）称样量 称取同一被感染小麦样品10.0、14.0、18.0g，进行样品量对检测结果的影响的试验。研究结果表明，在本试验条件下，称样量对测试结果无明显的影响。本方法称样量定为10.0g。 2）提取时间 称取同一被感染的小麦样品10.0g，选择0.5、1.0、2.0min三个梯度，进行提取条件的优化，结果表明，提取时间对样品危害真菌孢子计数无明显的影响，本方法提取时间定为1min。 3）过滤孔径 选择60、100、200、300、400、500目滤布，进行不同滤布孔径过滤，对检测结果的影响试验。结果表明，采用不同孔径滤布过滤对最终检测结果无明显的影响，但对观察的显微镜视野有显著的影响，在本方法中推荐滤介质孔径为300目。 3.2.2重复性 选择了三个不同感染水平的小麦和稻谷样品，进行方法的重复性试验（n=8），结果见表1。 表1 重复性实验（n = 8） 样品 真菌孢子数/105个/g 小麦 稻谷 1 7.0 14.5 30.0 9.5 16.5 29.6 2 8.0 17.3 34.5 5.3 14.5 26.3 3 9.0 18.8 34.5 3.0 18.0 36.5 4 9.5 19.5 36.4 8.3 15.0 30.8 5 10.9 21.5 37.1 8.0 20.5 37.9 6 10.5 23.3 37.1