瘰消饮诱导淋巴瘤Raji细胞凋亡的初步实验的研究.pfg.doc

中文摘要 瘰消饮诱导淋巴瘤Ｒａｊｉ细胞凋亡的初步实验研究 摘  要 目的：恶性淋巴瘤（Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｌｙｍｐｈｏｍａ，ＭＬ）是一种 起源于淋巴造血组织的实体瘤。在我国，恶性淋巴瘤虽然相 对少见，但近年来年新发病例数逐年上升。国内、外对于淋 巴瘤的研究已有百余年历史。现代医学在治疗淋巴瘤方面已 经取得一定疗效，但预后仍较差。中医历代文献中虽然没有 恶性淋巴瘤这一病名，但就其临床症状和体征看，当属中医 “瘰疬＂、“失荣＂、“石疽”、“恶核＂、“痰核”等病范畴。对 此，历代文献记载有不少宝贵的治疗经验，值得借鉴。导师 刘亚娴教授参考历代文献（如：《医学心悟》、《医学衷中参 西录》、《伤寒温疫条辨》等），并考虑到淋巴瘤的临床表现 和发病特点，结合临床治疗体会，组成方剂瘰消饮。 经过多年临床实践证明，对于恶性淋巴瘤患者，瘰消饮 可明显改善其临床症状，提高生活质量，延长生存期，并在 放、化疗间歇期对预防淋巴瘤的复发和转移有显著疗效。对 不宜、不能放、化疗的患者，以及晚期患者的治疗也有一定 的疗效。有的患者甚至可较长期的带瘤生存。在临床运用取 得疗效的基础上，我们进行本实验研究，目的在于探讨瘰消 饮方剂在诱导恶性淋巴瘤细胞凋亡方面的作用机理，为该方 治疗恶性淋巴瘤提供客观依据，进一步指导和扩大临床应 用。 方法： 应用体外细胞培养技术，在查阅文献资料的基础上并经 中文摘要 预实验选取Ｏ．５ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌ、２．０ｍｇ／ｍｌ、４．０ｍｇ／ｍｌ、 ８．０ｍｇ／ｍｌ五个终浓度，同时设ＲＰＭＩ．１６４０为空白对照组，与 肿瘤细胞共同培养２４、４８、７２小时后，以苔盼蓝拒染法检 测瘰消饮水溶液对肿瘤细胞体外作用后的细胞存活率；采用 四氮唑盐（ＭＴＴ）法检测瘰消饮对淋巴瘤细胞Ｒａｊｉ的增殖抑制 作用；流式细胞术检测不同浓度瘰消饮水溶液对肿瘤细胞作 用后细胞的凋亡率及对细胞周期分布的影响；并且用流式细 胞术检测不同浓度瘰消饮作用肿瘤细胞后，对凋亡抑制基因 ｂｃｌ．２蛋白表达的影响。 结果： １苔盼蓝拒染法结果显示１．０ｍｇ／ｍｌ、２．０ｍｇ／ｍｌ、４．０ｍｇ／ｍｌ、 ８．０ｍｇ／ｍｌ浓度组瘰消饮分别作用于Ｒａｊｉ细胞２４、４８、７２小 时后，细胞生长均明显受到抑制，与对照组相比有明显差异 （Ｐ＜０．０５），在该浓度范围内呈现剂量．时间依赖性。但Ｏ．５ｍｇ／ｍｌ 浓度组与对照组相比没有差异（Ｐ＞Ｏ．０５）。各中药浓度组组间 两两比较差异明显伊＜Ｏ．０５）。 ２ ＭＴＴ比色法检测结果显示瘰消饮水溶液作用Ｒａｊｉ细胞 ２４、４８、７２小时后，１．０ｍｇ／ｍｌ、２．０ｍｇ／ｍｌ、４．０ｍｇ／ｍｌ、８．０ｍｇ／ｍｌ 浓度组均能够抑制肿瘤细胞增殖，与对照组相比有明显差异 （Ｐ＜Ｏ．０５），且增殖抑制率与药物作用浓度和时间呈正相关， 呈现剂量一时间依赖性。但Ｏ．５ｍｇ／ｍｌ浓度组与对照组相比没 有明显差异（Ｐ＞Ｏ．０５）。 ３流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡率结果显示经过 １．０ｍｇ／ｍｌ、２．０ｍｇ／ｍｌ、４．０ｍｇ／ｍｌ、８．０ｍｇ／ｍｌ浓度瘰消饮作用 Ｒａｊｉ细胞７２小时后，Ｇｏ／Ｇｌ期细胞比例增加，Ｓ期细胞比例 减少，与对照组相比有显著性差异（Ｐ＜Ｏ．０１）；而Ｏ．５ｍｇ／ｍｌ浓 中文摘要 度组虽然也使Ｇｏ／Ｇｌ期细胞比例增加，Ｓ期细胞比例减少， 但与对照组相比无显著性差异（Ｐ＞Ｏ．０５）。经过２．０ｍｇ／ｍｌ、 ４．０ｍｇ／ｍｌ、８．０ｍｇ／ｍｌ浓度瘰消饮作用肿瘤Ｒａｊｉ细胞７２小时 后，细胞凋亡率增高，与对照组相比有明显差异（Ｐ＜Ｏ．０５）。 Ｏ．５ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌ药物组作用肿瘤细胞７２小时后凋亡率 与对照组相比没有显著差异ｆＰ＞Ｏ．０５）。  ’ ４流式细胞术检测ｂｃｌ．２蛋白表达结果显示随着中药作 用浓度的增加ｂｃｌ．２蛋白表达率明显降低，１．０ｍｇ／ｍｌ、 ２．０ｍｇ／ｍｌ、４．０ｍｇ／ｍｌ、８．０ｍｇ／ｍｌ浓度组与对照组相比有显著 性差异（Ｐ＜Ｏ．０１）。０．５ｍｇ／ｍｌ浓度组与对照组相比没有明显差 异（Ｐ＞Ｏ．０５）。各中药浓度组组间比较均有显著差异（Ｐ＜Ｏ．０１）。 结论： 通过细胞体外培养实验结果可以发现，瘰消饮方在一定 浓度范围内具有明显抑制恶性淋巴瘤Ｒａｊｉ细胞增殖的作用， 并呈浓度和时间依赖性。瘰消饮能够影响细胞周期分布，引 起Ｇｏ／Ｇ】期阻滞，诱导肿瘤细胞凋亡。瘰消饮的这些作用可 能与其下调ｂｃｌ．２蛋白表达率有关。 关键词：瘰消饮；Ｒａｊｉ细胞；细胞凋亡；ｂｃｌ一２；流式细 胞术 英文摘要 Ｌｕｏｘｉ  ）＂ｉｎｉｙｏ’ ｍｐｈａｄｕｎｏｌｌｅｃ 。．ｉ ｓｉｓｏａｒｙ ｏｏａｌｌｅＣｕｃｌｙ ＡＢＳＴＲＡＣＴ  ’Ｓ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｌｙｍｐｈｏｍａ