吴茱萸碱对人涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞侵袭的影响.pfg.docVIP

“１‘ ｆＩＩ Ｅ Ｉ Ｉ １ １１１１３３１１１１ １１ ＩＩ ＼１ ７７９４９９ 目  录 中文摘要………………………………………………………………………ｌ 英文摘要………………………………………………………………………３ 研究论文吴茱萸碱对人涎腺腺样囊性癌细胞系ＡＣＣ．Ｍ侵袭的影响 前言Ｊ舌…………………… ……………………………………………． ６ 材料与方法……………………………………………………………．７ 结果 附图 附表  …………………………………………………………………．１２ …………………………………………………………………．１４ …………………………………………………………………．１９ 讨论…………………………………………………………………．２０ 结论  ．：………………………………………………………………．．２２ 参考文献……………．．………………………………………………．．２３ 综述吴茱萸碱抑制肿瘤作用的研究进展…………………………………．２７ 个人简历……………………………………………………………………３８ 中文摘要 茱萸碱对人涎腺腺样囊性癌ＡＣＣ．Ｍ细胞侵袭的影响 摘  要 目的：涎腺腺样囊性癌（ｓａｌｉｖａｒｙ ａｄｅｎｏｉｄ ｃｙｓｔｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＳＡＣＣ）， 是最常见的涎腺恶性肿瘤之一，该肿瘤具有侵袭性强、浸润性生长，早期 沿神经血管束向远处扩展和转移等特征。目前临床对于涎腺腺样囊性癌的 治疗仍以手术切除为主，但手术治疗难以彻底切除，术后复发率较高，远 期疗效较差，对放疗不敏感，传统的化疗药物效果不显著，因此，探索新 的治疗方法成为学者们关注的焦点，利用从植物中提取的有效成分影响肿 瘤细胞的侵袭成为目前研究的热点之一。中药吴茱萸为芸香科植物吴茱萸 干燥近成熟果实，吴茱萸碱（ｅｖｏｄｉａｍｉｎｅ）为其主要活性物质。近来的研究 表明，吴茱萸碱可抑制肿瘤细胞的转移与浸润。本研究拟采用不同浓度的 吴茱萸碱处理人涎腺腺样囊性癌ＡＣＣ．Ｍ细胞后，观察不同时间点的Ａ Ｃ Ｃ．Ｍ细胞对Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室侵袭的情况。为临床应用中药制剂预防并治疗 人涎腺腺样囊性癌的转移与侵袭提供实验依据。 方法： ｌ材料 （１）细胞系：高转移ＡＣＣ．Ｍ人涎腺腺样囊性癌细胞系，购自上海 交通大学医学院口腔外科实验室，由上海交通大学医学院口腔颌面外科 １９９５年建立。 （２）吴茱萸碱：对照品，中国药品生物制品检定所提供。 （３）Ｍａｔｒｉｇｅｌ（４）Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室（跨膜细胞培养器，膜的孔径为８Ｉ，ｔｍ）等。 ２方法 （１）药液配制：吴茱萸碱用二甲基亚砜溶解配制成２０ｍｇ／ｍｌ储存液， 使用前用培养液稀释。 （二甲基亚砜的终浓度小于０．１％；此浓度对细胞 无影响）。 （２）细胞培养：采用ＲＰＭｌｌ６４０培养基加入１０％胎牛血清和 青霉素（１ ００Ｕ／ｍ１）、链霉素（１ ００蚓ｍ１），于３７℃、５％Ｃ０２恒温箱内饱 和湿度下培养，２４＂、一４８小时传ｌ代，以Ｏ．０４％二乙胺四乙酸二钠（ＥＤＴＡ） 和０．２５％胰蛋白酶（１：１）混合液消化传代。（３）ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室下室内加 入含有肝细胞生长因子（ＨＧＦ） （化学趋化物）的ｌＯ％的细胞培养液 ２００ｕｌ（３０ｎｇ／２００Ｉ．ｄ），上室膜的底面预先铺好Ｍａｔｒｉｇｅｌ ５０｝ｔｌ；（４）在每个 中文摘要 ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室的上室中加入含有２×１０５个ＡＣＣ．Ｍ细胞的分别用０９９／ｍｌ（空 白对照），Ｏ．０１｝ｔｇ／ｍｌ，Ｏ．１９９／ｍｌ，ｌｇｇ／ｍｌ，  １０９９／ｍｌ，  １００｝ｔｇ／ｍｌ的吴 茱萸碱处理（３７℃，２０ｍｉｎ）的ＡＣＣ．Ｍ细胞悬液（细胞为处于生长对数 期的细胞）２００｝ｄ，３７℃，５％Ｃ０２条件下孵育。每组３个复孔。孵育２ｈ、 ４ｈ、６ｈ、８ｈ、１０ｈ后，用棉签擦去微孔膜上室面的细胞，１ ０％中性福 尔马林固定３０分钟，瑞姬染色； （５）．将整个膜以“井’’字划为９格， ４００ｘ镜下观察，在中心格随机选一个视野，膜周边格随机选四个格， 各选一个视野，计数５个视野穿过微孔膜的细胞总数。侵袭抑制率公 式如下： （对照小室穿膜细胞数均值．处理小室穿膜细胞数均值）／对照小 室穿膜细胞数均值×１００％ｒ （’６）统计处理：采用重复测量的方差分析。 结果：吴茱萸碱处理组（实验组）较对照组穿过上室底面膜的细胞数 少，细胞数随浓度增大，时间增长基本呈递减趋势，侵袭抑制率随浓度的 增大而增大，随时间的增长而增大，其中ｌＯ小时，１００１ａｇ／ｍｌ时，侵袭抑 制率可达５９．９９％。经统计学分析，不同浓度之问存在差别， （Ｆ＝７．２４５， Ｐ＜０．０５），不同时间之间不存在差别（Ｆ