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影响体外组织培养保存关节软骨活性的因素 　　[摘要] 体外培养保存的关节软骨组织是关节软骨移植材料重要来源。但是由于保存时间偏短的弊端限制了其临床应用。软骨组织从相应的供体取出后如何在体外保存，在保存过程中又有哪些因素影响软骨细胞的存活率是众多学者一直研究的问题。本文从影响体外培养保存软骨组织活性的Wnt/β-catenin信号通路、癌基因、应力、细胞因子、中药等因素入手，系统地分析了影响体外组织培养保存关节软骨活性的因素，以期为软骨保存方法的下一步改良提供参考依据。 　　[关键词] 关节软骨；Wnt/β-catenin信号通路；癌基因；应力；细胞因子；中药 　　[中图分类号] R322.7+1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）010（a）-0194-03 　　随着现代经济水平的发展以及人们运动意识的增强，各种原因导致的关节软骨损伤患者数量迅猛增加。目前同种异体软骨移植技术是治疗该损伤的理想方法之一，该技术分为自体和异体移植。自体移植的软骨来源有限，给患者造成再次损伤，所以应用较少。异体组织移植能很好的解决这个问题，但异体软骨组织在体外如何保持良好的活性进而保障较高的植入存活率一直是困扰的难题。由于影响因素众多，本文从典型的内部机制及外部作用因素进行综述。 　　1 Wnt细胞信号通路对软骨组织体外保存活性的影响 　　Wnt信号通路是近年来发现的对细胞发生发展有异常作用的通路，可分为经典通路（Wnt/β-catenin通路）和非经典通路（Wnt/PCP信号通路、Wnt/Ca2+通路）。本文主要分析经典通路对体外保存软骨组织活性的影响。研究显示，Wnt/β-catenin通路是软骨发育、关节形成的重要调控机制。经典信号通路主要由以下部分组成：β-catenin、糖原合酶激酶3β（GSK-3β）、轴蛋白（axin）、APC（adenomatous polyposiscoli）、胞质内Disheveled（DSH）蛋白、酪蛋白激酶α（CKlα）等，其中axin、APC、GSK-3β、CKⅠα组成的复合体可以调切细胞内的β-catenin水平，具体作用机制是DSH发生磷酸化后向细胞膜聚集，与axin、APC、GSK-3β、CKⅠα组成的复合体相结合，Frat1/GBP通过胞质内DSH蛋白进入该复合体，与axin竞争结合GSK-3β，进而阻断β-catenin的降解。总的来说，经典的信号通路可以概括为：跨膜受体Frizzled蛋白（Frz蛋白）与低密度脂蛋白受体相关蛋白5和6（LRP5/6）组成的共同受体，可与Wnt蛋白相结合，进而激活Wnt/β-catenin信号途径。近年来许多研究通过在培养液中添加一些特定的因子激活或者抑制Wnt/β-catenin信号通路后，观察Wnt/β-catenin信号通路变化对软骨组织体外保存的影响，如Wnt/β-catenin通路与HMGB2相互作用可以维持软骨表浅区的稳定，HMGB2可以使LEB-1-β-catenin复合体的活性增强，进而拮抗β-catenin作用，促进软骨细胞的存活[1]；SFRP5（secreted frizzled related protein-5）是Wnt分子的拮抗剂，通过对大鼠的FRZB或SFRPS抑制实验发现，膝关节软骨细胞中MMPs活性增强，蛋白聚糖减少[2]；还有研究表明通过添加Wnt分子抑制剂DKK-1可以减缓软骨病变[3]。 　　Wnt信号通路对体外保存软骨组织活性的作用是多方面的，既有促进软骨发育的一面，又有促进软骨老化、诱发骨性关节炎的一面，但其具体原因尚不明确，目前对Wnt信号通路的研究报道甚少。Wnt信号通路是控制软骨组织体外保存活性的新突破，对其做深入研究有重要意义。 　　2 癌基因对软骨组织体外保存的影响 　　软骨组织体外保存的良好活性依赖于各相关基因之间的平衡。 　　2.1 p53基因 　　p53基因与人类肿瘤的相关性最高，可分为野生型和突变型，其中野生型p53可诱导关节软骨细胞的凋亡，在凋亡细胞中表达阳性，是细胞周期和DNA修复的重要调节因子，并且还可以限制细胞的生长，在细胞凋亡过程中起关键信号作用[4]。 　　2.2 Bcl-2基因家族 　　目前记载的Bcl-2家族成员最少有25个，根据其结构和功能的不同分为促凋亡蛋白（Bax、Bak、Bad、Bik等）和抗凋亡蛋白（Bcl-2、Bcl-xl、Bcl-w等）。研究显示，Bcl-2家族主要位于细胞的线粒体膜、内质网膜等相关部位，其作用机制是通过调节线粒体膜的通透性，影响膜电位和细胞色素C的释放，通过调节内质网腔内Ca2+浓度来影响细胞的活性[5]。Bcl-2基因主要在18号染色体上，具有抑制细胞凋亡和延长细胞寿命的功能[6]。Bcl-