响应面法对甘薯茎叶绿原酸超声提取工艺的优化.docVIP

响应面法对甘薯茎叶绿原酸超声提取工艺的优化 　　摘要：为优化甘薯[Ipomoea batatas（L.） Lam.]茎叶中绿原酸超声提取工艺，在单因素试验的基础上，选择乙醇溶液体积分数、提取时间、料液比（g：mL，下同）3个对绿原酸提取率影响较大的因素，采用Box-Behnken中心组合试验设计对各因素进行优化组合，运用Design Expert 8.05b软件进行响应面回归分析，建立了绿原酸提取率的二次多项式回归方程。得到的优化组合条件为乙醇溶液体积分数70%、料液比1∶20、超声时间24 min，绿原酸提取率为3.097 2%，与响应面拟合所得方程的预测值3.106 8%相近。试验所用甘薯茎叶价廉易得，提取方法高效可行，分析方法可信，可为甘薯茎叶的开发利用提供依据。 　　关键词：甘薯[Ipomoea batatas（L.） Lam.]茎叶；绿原酸；超声提取；响应面分析 　　中图分类号：S531 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）09-2201-05 　　绿原酸具有较强的药理活性，对消化、血液和生殖系统疾病有显著疗效。绿原酸是金银花、杜仲等中药材以及复肝宁、双花注射液等中成药的主要有效成分[1]，同时也是某些中药制剂质量监控的重要指标之一[2]。除医用外，绿原酸还可广泛应用于保健食品、饮料[3]以及化妆品等领域[4]。目前，绿原酸主要是从金银花[5，6]或杜仲[7，8]中提取，多数产品是浸膏，其含量为15%～30%。金银花和杜仲是传统中药材，亦是食材，需求量大但资源量相对较少。以金银花和杜仲为原料提取绿原酸，生产成本较高。研究表明[9]，甘薯[Ipomoea batatas（L.） Lam.]茎叶中含绿原酸，是甘薯茎叶主要活性成分之一。甘薯种植广泛，其茎叶价格低廉，以其为原料提取绿原酸，可大大降低成本。目前，从甘薯茎叶中提取绿原酸的报道较少，并且多为正交设计[10，11]，不能考察各因素交互作用对绿原酸提取率的影响。本研究在单因素试验的基础上，通过3因素3水平Box-Behnken中心组合试验，运用Design Expert 8.05b软件进行响应面回归分析，建立回归模型，优化绿原酸提取的工艺条件，以期为甘薯茎叶资源的开发利用提供试验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料、试剂与仪器 　　1.1.1 试验材料 甘薯茎叶，采摘于广西省柳州市，经清洗、晒干、烘干（60 ℃烘10 h）、粉碎过筛（40目）后备用。 　　1.1.2 主要试剂 绿原酸标准品（含量≥98%），天津光复精细化学品研究所；乙醇、盐酸等均为分析纯，国药集团药业股份有限公司。 　　1.1.3 仪器 UV-9600型紫外-可见分光光度计，北京瑞利分析仪器有限公司；FA2004B型电子天平，上海越平科学仪器有限公司；KQ3200DA型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；GZX-DH?400S型电热恒温干燥箱，上海跃进医疗器械有限公司；HH-S4型数显恒温水浴锅，江苏省金坛市医疗仪器厂。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 绿原酸标准曲线的绘制 精确称取0.005 0 g绿原酸标准品，用70%乙醇定容于100 mL的容量瓶中。准确移取0、1.00、2.00、3.00、5.00、7.00 mL该溶液于25 mL容量瓶中，用70%乙醇定容。采用紫外-可见分光光度计在200～400 nm波长对绿原酸对照品进行扫描，得出其最大吸收波长为328.8 nm，在328.8 nm波长处测定标准溶液的吸光度，以标准溶液质量浓度为横坐标，测得的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线图。拟合得到回归方程为A=0.046 6C-0.005 1，R2=0.999 8。 　　1.2.2 绿原酸的提取工艺流程及测定 提取工艺：准确称取一定量（过40目筛）干燥甘薯茎叶→按一定料液比加入提取剂→加HCl溶液调至pH 4→浸泡24 h→在室温下超声提取一定时间→抽滤→滤渣重复提取1次→合并2次滤液→定容（250 mL）。 　　绿原酸含量测定：准确移取提取液2.00 mL于25 mL容量瓶，按“1.2.1”的方法在328.8 nm处测定其吸光度。 　　绿原酸含量（g/mL）=（C×V1×N×V）/（V2×106） 　　式中，C为绿原酸浓度；V为提取液总体积；V1为取样量；N为稀释倍数；V2为待测溶液体积。 　　1.2.3 单因素试验 分别以不同提取剂（水、甲醇、80%乙醇和丙酮）、乙醇溶液体积分数（50%、60%、70%、80%、90%）、料液比（1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30，g∶mL，下同）、超声时间（15、20、25、30、35 min）为因素，考察各因素对甘薯茎叶绿原酸提取率的影响。 　　1.2.4 响应面设计