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* Regulation of the transcription factor NF-kB1 by microRNA-9 in human gastric adenocarcinoma 汤 华 htang2002@ 天津市生命科学中心实验室 天津医科大学 miRNA, a functional non-coding RNA highly conserved, ~22nt ssRNA (mature) a class of small noncoding functional RNAs mediate post-transcriptional regulation of gene expression in a sequence specific manner now known to be key players in a variety of biological processes, including tumorigenesis and virus-host cells interaction miRNA的生物学特性 天津市生命科学中心实验室 miRNAs cancer RNAi mechanisms Research interesting miRNAs viruses Differential expression of miRNA in gastric cancer tissues compared with normal tissues 一、miR-9在胃腺癌细胞中的作用研究 N：正常胃组织；Ca：胃腺癌组织；** p0.01 天津市生命科学中心实验室 miR-9在胃腺癌组织和对应正常胃组织中的差异表达 Real-time PCR 天津市生命科学中心实验室 Real-time PCR A B C MTT检测MGC803细胞转染pri-miR-9后生长活性变化 细胞集落形成实验分析MGC803细胞转染pri-miR-9后增殖能力的变化 天津市生命科学中心实验室 细胞集落形成实验分析MGC803细胞转染pri-miR-9后增殖能力的变化 天津市生命科学中心实验室 免疫功能缺陷型裸鼠实验分析MGC803细胞转染pri-miR-9后体内生长速度的变化 Tumor suppressor 天津市生命科学中心实验室 miR-9 靶基因 抑制胃腺癌细胞增殖 - 天津市生命科学中心实验室 天津市生命科学中心实验室 PicTar TargetScan miRBase Targets 二、胃腺癌中miR-9靶基因的预测及验证 生物信息学方法 预测靶基因 NF-kB1 NF-kB1的功能简介 核因子NF-kB是从B细胞核提取物中发现的一种能与免疫球蛋白k轻链基因的增强子kB序列特异结合的蛋白因子。 NF-kB1是NF-kB家族的一员， NF-kB1 (P50)是由前体P105水解后形成。现证实其广泛存在于真核细胞内，能与多种细胞基因启动子或增强子序列特定位点发生特异性结合而促进转录和表达，与炎症反应、免疫应答以及细胞的增生、转化和凋亡等重要的病理生理过程密切相关。 其抗凋亡、促细胞增殖和免疫激活功能是导致正常细胞恶变的潜在因素。 pcDNA3/EGFP- NF-κB1 3’UTR 荧光报告载体实验 miR-9表达变化后NF-κB1 mRNA和蛋白表达水平的变化 Real-time PCR Western blot 天津市生命科学中心实验室 Real-time PCR N：正常胃组织；Ca：胃腺癌组织；*p0.05 NF-kB1 mRNA在胃腺癌组织和对应正常胃组织中的差异表达 天津市生命科学中心实验室 三、 NF-kB1在胃腺癌细胞中的作用研究 表达NF-kB1 siRNA 天津市生命科学中心实验室 MTT实验 细胞集落 形成实验 MTT实验和细胞集落形成实验检测MGC803细胞表型变化 天津市生命科学中心实验室 1. Real-time PCR检测发现miR-9在胃腺癌组织表达下调, NF-kB1基因表达上调。 2. 通过MTT实验，细胞集落形成实验和免疫功能缺陷型裸鼠移植瘤实验，证明miR-9在胃腺癌细胞中具有抑癌基因的活性，起到抑制细胞增殖的作用。 3.利用生物信息学方法和实验验证了miR-9对NF-kB1起到负性调控作用，证明NF-kB1是miR-9的直接靶基因。 4.利用RNA干扰技术敲除NF-kB1后通过MTT实验和细胞集落形成实验，证明NF-kB1起到促进细胞增殖的作用。 miR-9在胃腺癌中发挥Tummor suppressor作用 HY. Wan…H. Tang. Mol Cancer (2010) LH. Zhu…H. Tang. FEBS