高效液相色谱―串联质谱法测定兽药制剂中的金刚烷胺.docVIP

高效液相色谱―串联质谱法测定兽药制剂中的金刚烷胺 　　摘要：根据金刚烷胺的化学性质，结合已有提取方法与仪器公司给予的技术参考，采用高效液相色谱-串联质谱法对兽药制剂中金刚烷胺添加量进行检测，建立了兽药制剂中违禁药物金刚烷胺的高效液相色谱-串联质谱检测方法。用5 %氨水甲醇∶异丙醇（4∶1）超声提取试样中违禁添加物金刚烷胺，以0.1 %甲酸/甲醇溶液进行梯度洗脱，采用电离喷雾电离方式（ESI+），通过多反应监测（MRM）定量。该法灵敏度高，线性关系良好，相关系数r达到0.99，回收率在80.2%～99.8%之间，相对标准偏差（RSD）均小于8%。方法快速、简便、精确度高、准确度高，适用于兽药制剂中金刚烷胺违法添加的定性、定量分析。 　　关键词：兽药制剂；金刚烷胺；违禁药物；高效液相色谱-串联质谱 　　中图分类号：O657.7+2；S959.79 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）01-0180-03 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.01.047 　　金刚烷胺又叫盐酸金刚烷胺，为对称的三环癸烷，于1960年首次合成，是国际医学界公认对流感病毒有抑制作用的抗病毒药物[1]，生产上主要用于鸡、猪流感的预防和早期治疗，禁止用于抗病毒兽药、规模养殖场饲料等。但养殖户存在滥用现象，对其毒副作用了解不足，用药剂量偏高，常造成养殖动物中毒。 　　为避免影响国家动物疫病强制性免疫政策落实，给重大动物疫病防控工作带来不良后果，农业部于2005年以农医发[2005]33号文发布了《关于清查金刚烷胺等抗病毒药物的紧急通知》，规定除经批准生产、使用的疫苗产品外，禁止将金刚烷胺用于防治高致病性禽流感等一类病原微生物引起的病毒性疫病[2]。 　　目前国内尚未确定兽药制剂中金刚烷胺残留量测定的法定方法，文献报道有动物源食品[3-9]、药物[10-12]和人体血浆[13]中检测，鲜见兽药制剂中金刚烷胺残留量测定方法的报道。本研究根据金刚烷胺的化学性质，以现有的文献为基础，采用高效液相色谱-串联质谱法对兽药制剂中金刚烷胺添加量进行检测，经分析，该方法检测灵敏度高、专属性强，对保障兽药安全具有重要的意义。 　　1 材料与方法 　　1.1 仪器与试剂 　　ACQUITY Ultra Performance LC超高效液相色谱仪（美国，Waters公司），TQD串联四极杆质谱仪（美国，Waters公司），离心机 HC-3518，涡旋混合器TALBOYS Advanced Vortex Mixer，KQ-500DB型超声波发生器。 　　异丙醇和氨水（中国，天津市科密欧化学试剂有限公司），甲醇（美国，Fisher公司），金刚烷胺标准品（德国Dr.Ehrenstorfer公司），试验用水均为蒸馏水。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 样品前处理 准确称取1.00 g试样至50 mL离心管中，加入10.00 mL 5% 氨水甲醇∶异丙醇（4∶1）溶液超声提取20 min，然后8 000 r/min离心5 min；用移液枪准确移取1.0 mL上清液至10 mL试管中，上清液用氮气吹至近干，准确吸取1 mL 1∶9的0.1%甲酸水溶液∶甲醇溶液到该试管中，涡旋复溶，过0.22 μm滤膜至进样瓶，进行仪器分析。 　　1.2.2 色谱条件 色谱柱C18柱（50 mm×2.1 mm，1.8 μm）；柱温35 ℃；流速0.3 mL/min；进样量10 μL；流动相0.1%甲酸和甲醇，梯度洗脱程序见表1。 　　1.2.3 质谱条件 电离方式电喷雾电离（ESI+）；扫描方式正离子扫描；离子源温度110 ℃；脱溶剂气温度380 ℃；锥孔气流氮气，流速50 L/h；去溶剂气流氮气，流速600 L/h；碰撞气氩气，碰撞气压3.50×10-4 MPa；检测方式多反应监测（MRM）；多反应监测条件见表2。 　　2 结果与分析 　　2.1 方法的线性范围 　　用基质空白将金刚烷胺标准溶液稀释至适当浓度（0.00、0.05、0.10、0.20、0.50 mg/L）进行测定，以峰面积（Y）为因变量，相应的浓度（X）为自变量作图。结果表明，金刚烷胺溶液浓度与对应的峰面积呈现良好的线性关系，相关系数为0.996 2。以信噪比（S/N）≥10计算，方法的定量限为0.5 mg/kg。 　　2.2 方法的回收率与精密度 　　按照SN/T0001标准的规定，禁用物质或未设定容许限的物质，一般选择LOQ、2LOQ、10LOQ作为添加浓度水平进行回收率试验，本方法用不含以上金刚烷胺的空白样品基质进行3个浓度水平（0.5、1.0、5.0 mg/kg）的添加回收试验，每个浓度水平进行6次重复试验，测得各种农